【摘要】 本发明公开了重组人源LECT2蛋白在毕赤酵母中的表达及纯化方法,特点是包括将人工合成的人源LECT2基因插入胞外表达载体pPICZαA中构建重组表达质粒的步骤;酶切线性化后电击导入毕赤酵母X33中,获得重组工程菌株的步骤;经过摇瓶
【摘要】 本发明公开了一种仅鼻拟人吸烟大鼠免疫功能评价指标的筛选方法,包括步骤:以吸空气大鼠血清、脾淋巴细胞、脾淋巴细胞培养上清液、腹腔巨噬细胞及血液作为正常对照组,经鼻连续抽吸卷烟大鼠血清脾淋巴细胞、脾淋巴细胞培养上清液、腹腔巨噬细胞及血液作为吸烟组;检测各组淋巴细胞增殖能力、腹腔巨噬细胞吞噬情况、IL-6、TNF-α、Ig、IgG、IgE含量和白细胞分类计数;最终筛选出淋巴细胞增殖的刺激指数、IL-6、IgG、IgE含量、白细胞分类计数五个指标作为敏感稳定的评价指标反应吸烟大鼠免疫功能的变化。该方法科学全面,筛选出的评价指标具有良好的敏感稳定性。 【专利类型】发明授权 【申请人】浙江中烟工业有限责任公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】310009 浙江省杭州市上城区建国南路288号 【申请人地区】中国 【申请人城市】杭州市 【申请人区县】上城区 【申请号】CN201210254861.3 【申请日】2012-07-23 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102735804B 【公开公告日】2014-10-29 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102735804B 【授权公告日】2014-10-29 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N33/00 【发明人】周国俊; 储国海; 胡瑗; 王琴美; 黄芳芳 【主权项内容】一种拟人吸烟大鼠免疫功能评价指标的筛选方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)以吸空气大鼠的血清、脾淋巴细胞、脾淋巴细胞培养上清液、腹腔巨噬细胞及血液作为正常对照组,经鼻连续抽吸卷烟的大鼠的血清、脾淋巴细胞、脾淋巴细胞培养上清液、腹腔巨噬细胞及血液作为吸烟组;(2)利用MTT增殖法检测步骤(1)中各组脾淋巴细胞增殖能力,比较各组检测结果,分析相互的显著性差异情况,若吸烟组与正常对照组相比有显著性差异,筛选出该指标作为评价指标,反之,放弃;(3)利用鸡红细胞吞噬实验法检测步骤(1)中各组腹腔巨噬细胞吞噬百分比和吞噬指数,比较各组检测结果,分析相互的显著性差异情况,若吸烟组与正常对照组相比有显著性差异,筛选出该指标作为评价指标,反之,放弃;(4)利用ELISA法检测步骤(1)中各组脾淋巴细胞培养上清液和血清中IL-6及TNF-α细胞因子浓度,比较各组检测结果,分析相互的显著性差异情况,若吸烟组与正常对照组相比有显著性差异,筛选出该指标作为评价指标,反之,放弃;(5)检测步骤(1)中各组血清中总Ig含量、IgG含量及IgE含量,比较各组检测结果,分析相互的显著性差异情况,若吸烟组与正常对照组相比有显著性差异,筛选出该指标作为评价指标,反之,放弃;(6)利用瑞氏染液染色法检测步骤(1)中各组血液中白细胞分类计数,比较各组检测结果,分析相互的显著性差异情况,若吸烟组与正常对照组相比有显著性差异,筛选出该指标作为评价指标,反之,放弃。 【当前权利人】浙江中烟工业有限责任公司 【当前专利权人地址】浙江省杭州市上城区中山南路77号 【专利权人类型】有限责任公司(国有独资) 【统一社会信用代码】91330000142916794U 【引证次数】3.0 【自引次数】1.0 【他引次数】2.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】6
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