【摘要】 本发明提供一种检测活动性肺结核病的诊断试剂盒，由RNA提取缓冲液，活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物、内参反转录引物、PCR引物以及荧光定量RT-PCR反应液构成，其中活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成：hsa-miR-29c、hsa-miR-22、hsa-miR-320b和hsa-miR-101。本发明采用活动性肺结核病的特异血清miRNAs组合，在血清miRNAs水平上对活动性肺结核病检测，灵敏度为90.2%、特异性为75.0%，对活动性肺结核病具有早期诊断价值，可实现对活动性肺结核病的早期预警和早期诊断。 【专利类型】发明授权 【申请人】浙江大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号 【申请人地区】中国 【申请人城市】杭州市 【申请人区县】西湖区 【申请号】CN201210338287.X 【申请日】2012-09-13 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103045723B 【公开公告日】2014-07-23 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103045723B 【授权公告日】2014-07-23 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12Q1/68; C12R1/32 【发明人】李继承; 张星 【主权项内容】1.一种检测活动性肺结核病的诊断试剂盒，由RNA提取缓冲液，活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物、内参反转录引物和PCR引物以及荧光定量RT-PCR反应液构成，其中活动性肺结核病特异的血清miRNA组合物由4个差异表达的血清miRNAs组成：hsa-miR-29c、hsa-miR-22、hsa-miR-320b和hsa-miR-101；所述的RNA提取缓冲液有：Lysis Reagent、氯仿、无水乙醇、RWT溶液、RPE溶液和RNAase-free水；所述的荧光定量RT-PCR反应液，包括反转录和荧光定量PCR反应液；其中反转录反应液有：总RNA、2μM反转录引物、5×反应缓冲液、10mM dNTP、RNase抑制剂、反转录酶；荧光定量PCR反应液有：包含有TliRnaseH Plus的Premix Ex TaqTM、PCR上游引物、PCR下游引物、ROX Reference Dye、模板cDNA和ddH2O； 逆转录引物序列为： hsa-miR-29c：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTAACCG-3’， hsa-miR-22：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACACAGTT-3’， hsa-miR-320b：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCCCGTT-3’， hsa-miR-101：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTTCAGT-3’， 内参hsa-miR-16：5’-GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCGCCAA-3’， PCR上游引物序列为： hsa-miR-29c：5’-GGCGGTAGCACCATTTGAA-3’， hsa-miR-22：5’-CGGAAGCTGCCAGTTGAAGA-3’， hsa-miR-320b：5’-AAAAGCTGGGTTGAGAGGGCA-3’， hsa-miR-101：5’-GGGTACTGTGATAACTGAAGG-3’， 内参hsa-miR-16：5’-CGCGCTAGCAGCACGTAAAT-3’； PCR通用的下游引物序列是：5’-AGTGCAGGGTCCGAGGTATT-3’。。 【当前权利人】浙江大学 【当前专利权人地址】浙江省杭州市西湖区浙大路38号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000470095016Q 【家族被引证次数】10

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