【摘要】 本发明公开了一种人类粪便DNA提取方法。现有技术很繁琐而且耗时，且过去采样的方法抽提出的痕量DNA由于含量太少，很难用来进行分子诊断。本发明对粪便样品采用选择性样品采集PSC，采用低温保存法，然后用灭菌枪头或灭菌刀片挑取样本，直接置于冰上；首先加入粪便裂解液，充分裂解混匀后加入牛血清白蛋白，离心去上清液加入蛋白酶K置于58℃条件下消化反应，然后加入蛋白沉淀液沉淀蛋白，离心取上清液加入硅胶膜结合液充分结合DNA，离心取沉淀物加入硅胶膜洗涤液洗涤两次，离心后加入TE缓冲液，最后得到含DNA的保存液。本发明具有较高的重复稳定性、较简单且不耗时的优点。 【专利类型】发明授权 【申请人】浙江世纪康大医疗科技有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】311215 浙江省杭州市萧山区建设四路99号 【申请人地区】中国 【申请人城市】杭州市 【申请人区县】萧山区 【申请号】CN201210320895.8 【申请日】2012-09-03 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102864138B 【公开公告日】2014-05-21 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102864138B 【授权公告日】2014-05-21 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12N15/10 【发明人】秦炜; 毕婷婷; 阮丽娟; 陈标榜; 余向东 【主权项内容】1.一种人类粪便DNA提取方法，其特征在于该方法包括以下步骤：步骤一.粪便样品的采集采集人排出的暴露不超过24小时的粪便样品，采用选择性样品采集，用无菌刀片刮下粪便样品的表层黏膜，分装到2ml离心管中；步骤二.粪便样品的保存采用低温保存法，采集来的粪便样品，立即放于-20℃～-80℃保存；步骤三.粪便样品的取样对于所保存的粪便样品，拿出置于冰上，用灭菌枪头或灭菌刀片挑取180～200mg的样本，置于冰上；步骤四.样本的DNA提取(1).细胞裂解分离在样本中加入1.2～1.6ml的粪便裂解液，置于常温条件下充分裂解混匀后离心分离，取上清液，加入200～300mg牛血清白蛋白BSA去除杂质，离心分离得到上清液，在该上清液中加入20～40μl的浓度为20mg/ml的蛋白酶K置于58℃条件下消化反应1～6h，得到消化液；所述的粪便裂解液由50mmol/L Tris-Cl、5mmol/L EDTA、1mmol/LNaCl和重量体积比为0.1%十二烷基硫酸钠SDS配制而成；(2).沉淀将上述步骤(1)所得的消化液冰浴冷却至常温，再加入200～400μl蛋白沉淀液沉淀蛋白，充分混匀后经离心分离去除蛋白杂质，得到离心后的上清液，该上清液为DNA抽提液；(3).纯化向已经去除蛋白杂质的DNA抽提液中加入硅胶膜结合液，DNA抽提液与硅胶膜结合液的体积比为1 : 1.5～1 : 2.5，然后经硅胶膜吸附，离心分离，得到沉淀物，在沉淀物中加入700～800μl硅胶膜洗涤液洗涤，重复洗涤两次，然后离心分离脱去硅胶膜中残存的硅胶膜洗涤液后，加入50～100μl TE缓冲液溶解洗脱DNA，离心分离得到离心后的上清液，该上清液为含DNA的保存液；所述的硅胶膜结合液为3mol/L盐酸胍；所述的硅胶膜洗涤液由2mmol/L Tris-Cl、1mmol/L EDTA、5mmol/LNaCl和体积含量为50%的乙醇配制而成；所述的蛋白沉淀液由2mol/L乙酸钾和体积含量为11.5%冰乙酸配制而成。。微信 【当前权利人】浙江世纪康大医疗科技股份有限公司 【当前专利权人地址】浙江省杭州市萧山区经济技术开发区桥南区块春潮路93号4、5号楼4楼 【专利权人类型】有限责任公司(自然人投资或控股) 【统一社会信用代码】91330100753048105K 【引证次数】1.0 【他引次数】1.0 【家族引证次数】1.0 【家族被引证次数】20

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