【摘要】本发明涉及一种二氧化硫气体浓度探测电路。本发明包括微控制器、电源电路、信号调理电路、模数转换电路、存储电路、调试接口电路和状态指示及按键电路。信号调理电路、模数转换电路与微控制器IIC接口信号连接，存储电路与微控制器IO口信号连接，
【摘要】 本发明涉及一种结核分枝杆菌耐多药检测方法。目的是提供的方法应能同时测定结核分枝杆菌对异烟肼和利福平的耐药性，具有特异性与灵敏度较高、检测快速以及操作简便的特点。技术方案是：一种结核分枝杆菌耐多药检测方法，其步骤是：A、建立MTB临床菌株和标准菌株H37Rv的PCR模板；B、设计与异烟肼和利福平耐药密切相关katG、inhA和rpoB基因片段的三对引物，同时对临床菌株的katG、inhA和rpoB基因进行mPCR扩增；并对临床菌株和标准菌株H37Rv的katG、inhA和rpoB基因分别进行PCR扩增；C、采用单链构象多态性检测方法同时检测临床菌株耐INH和RFP相关的3个基因的突变情况。 【专利类型】发明授权 【申请人】孙爱华; 严杰; 李召东 【申请人类型】个人 【申请人地址】310058 浙江省杭州市滨江区滨文路481号浙江医学高等专科学校基础医学部 【申请人地区】中国 【申请人城市】杭州市 【申请人区县】滨江区 【申请号】CN201210043565.9 【申请日】2012-02-24 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102559916B 【公开公告日】2014-04-16 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102559916B 【授权公告日】2014-04-16 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12Q1/68; C12R1/32 【发明人】孙爱华; 严杰; 李召东 【主权项内容】1.一种非诊断目的的结核分枝杆菌耐多药检测使用的katG、inhA和rpoB基因片段PCR扩增方法，其步骤是：A、建立MTB临床菌株和H37Rv标准菌株的PCR模板；B、设计与异烟肼和利福平耐药密切相关katG、inhA和rpoB基因片段的三对引物，对临床菌株的katG、inhA和rpoB基因进行mPCR扩增；并对临床菌株和H37Rv标准菌株的katG、inhA和rpoB基因分别进行PCR扩增；C、采用单链构象多态性检测方法同时检测临床菌株耐INH和RFP相关的3个基因的突变情况；其特征在于：所述步骤B中的PCR引物是：扩增katG基因的上、下游引物分别为5’-AAGGAA GCC ACC TGG CTC GGC-3’以及5’-GCC GAA CGG GTC CGG GAT GGT-3’，扩增产物预期的大小为510bp；扩增inhA基因的上、下游引物分别为5’-GGC ATC CAC ATC TCGGCG-3’以及5’-CAG CGC GCA CAC CGT CTT GGC-3’，扩增产物预期的大小为381bp；扩增rpoB基因的上、下游引物分别为5’-ACA TCC GGC CGG TGG TCG CCG-3’以及5’-TTT CGA TCG GGC ACA TCC GGC-3’，扩增产物预期的大小为207bp；所述mPCR扩增的反应体系为：PCR总体积100μL，内含2.5mol/L dNTP、katG、inhA和rpoB基因的各自上、下游引物250mmol/L、2.5U Ex-Taq DNA聚合酶、2μL模板、pH8.3的1×PCR缓冲液；所述mPCR扩增的参数为：94℃4min；94℃30s、52℃30s、72℃45s，循环35轮；72℃5min；采用1μg/mL溴乙锭预染2%琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物；所述单链构象多态性检测方法是：将上述mPCR产物以及结核分枝杆菌H37Rv标准菌株katG、inhA和rpoB基因的PCR产物各10μL分别与等体积变性剂混合，沸水浴5min后冰浴2min，5000r/min4℃离心2min，取水相加入8%非变性聚丙烯酰胺凝胶上样孔，13℃400V电泳5min后120V电泳10h，然后取胶板进行银染法染色，观察结果；若单链位置与H37Rv标准菌株单链位置不同，称为运动变位，判定为基因突变；所述PCR扩增的反应体系中只加katG、inhA或rpoB基因的各自上、下游引物250mmol/L，反应体系其它成分以及PCR参数与mPCR相同。 【当前权利人】孙爱华; 严杰; 李召东 【当前专利权人地址】浙江省杭州市滨江区滨文路481号浙江医学高等专科学校基础医学部; ; 【被引证次数】3 【被他引次数】3.0 【家族被引证次数】17
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