【摘要】 本发明公开了一种将胞内蛋白基质表达的方法和其应用，属于生物工程技术领域。是将T.fusca角质酶和胞内目标蛋白在大肠杆菌中共表达，从而实现目的蛋白的胞外表达，发酵培养上清酶活可达到总酶活的80％以上，可简化后提取工艺，具有较高的学术意义和应用价值。 （，） 【专利类型】发明授权 【申请人】江南大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号 【申请人地区】中国 【申请人城市】无锡市 【申请人区县】滨湖区 【申请号】CN201210045965.3 【申请日】2012-02-27 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102586312B 【公开公告日】2014-07-09 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102586312B 【授权公告日】2014-07-09 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12N15/70; C12R1/19 【发明人】吴敬; 宿玲恰; 陈晟; 陈坚 【主权项内容】1.一种将胞内蛋白基质表达的方法，其特征在于，将NCBI编号为AAZ54921的角质酶基因和胞内目标蛋白基因在宿主菌大肠杆菌中表达，发酵培养并收集发酵上清液，所述胞内目标蛋白为在细胞内表达的蛋白质；具体方法为：1)将pETDuet-1质粒和Tfu_0883/pET20b(+)进行双酶切，连接酶连接过夜，连接产物转化E.coli JM109感受态细胞，得到重组质粒Tfu_0883/pETDuet-1；2)将Tfu_0883/pETDuet-1和含有胞内目标蛋白基因的重组质粒pET20b(+)进行双酶切，连接酶连接过夜，连接产物转化E.coli JM109感受态细胞，得到含有目标蛋白基因的重组质粒Tfu_0883/pETDuet-1；3)将含有目标蛋白基因的重组质粒Tfu_0883/pETDuet-1导入宿主大肠杆菌；4)步骤3)构建的重组大肠杆菌发酵生产目标蛋白，收集发酵上清液；所述Tfu_0883是NCBI编号为AAZ54921的角质酶基因。 【当前权利人】江南大学 【当前专利权人地址】江苏省无锡市蠡湖大道1800号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】1210000071780177X1 【引证次数】6.0 【被引证次数】1 【自引次数】6.0 【被自引次数】1.0 【家族引证次数】6.0 【家族被引证次数】8

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