【摘要】 狼尾蕨叶片诱导不定芽高频率植株再生方法，属于植物培养方法技术领域。现有的蕨类植物不定芽诱导植株再生技术尚停留在实验室研究阶段，且限于鹿角蕨科和肾蕨科。本发明以骨碎补科狼尾蕨无菌苗的叶片为外植体材料，在附加苯基脲类细胞分裂素CPPU2.0mg/L和吲哚丁酸IBA0.1mg/L的培养基上诱导不定芽发生，不定芽诱导频率达95%。在添加CPPU0.5mg/L和IBA0.1mg/L的培养基上进行不定芽增殖，不定芽每代增殖系数为5。不定芽在附加IBA0.2mg/L的培养基上成苗率达100%，并发育成具有根、茎、叶的完整小植株。本方法适用于狼尾蕨试管苗繁殖，为开展体细胞突变体筛选和基因转化研究工作提供条件。 【专利类型】发明申请 【申请人】江苏省农业科学院 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】210014 江苏省南京市钟灵街50号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】玄武区 【申请号】CN201010612354.3 【申请日】2010-12-30 【申请年份】2010 【公开公告号】CN102138522A 【公开公告日】2011-08-03 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN102138522B 【授权公告日】2012-08-22 【授权公告年份】2012.0 【IPC分类号】A01H4/00 【发明人】叶晓青; 佘建明; 邓衍明; 汤日圣; 童红玉 【主权项内容】1.狼尾蕨叶片诱导不定芽高频率植株再生方法，其特征在于： 1) 材料 选用狼尾蕨无菌苗的叶片为材料； 2) 培养基 基本培养基由MS大量元素、MS微量元素与B5维生素组成，添加蔗糖30 g/L，8 g/L的琼脂条作为固化剂； 不定芽诱导培养基：附加苯基脲类细胞分裂素CPPU 2.0 mg/L和IBA 0.1 mg/L； 不定芽增殖培养基：附加苯基脲类细胞分裂素CPPU 0.5 mg/L和IBA 0.1 mg/L； 成苗和生根培养基：附加生长素IBA 0.2 mg/L，活性炭质量比 0.1%； 上述各种培养基在高压灭菌前用氢氧化钠和盐酸调整pH值至5.8； 3) 方法 在超净工作台上剪取狼尾蕨无菌苗的叶片，接种在步骤2)所述不定芽诱导 培养基上，20 d从叶片诱导产生出不定芽；不定芽转到步骤2)所述不定芽增殖培养基上进行继代增殖培养，30 d为一个周期；不定芽转移到步骤2)所述成苗和生根培养基上，发育成具有根、茎、叶的完整小植株； 不定芽的诱导和增殖、成苗和生根培养均在光照条件下进行，光照强度为 1500 lx，光照时间为12 h/d；培养室温度为26℃±2℃。 【当前权利人】江苏省农业科学院 【当前专利权人地址】江苏省南京市钟灵街50号 【统一社会信用代码】123200004660052848 【引证次数】2.0 【被引证次数】2 【自引次数】1.0 【他引次数】1.0 【被他引次数】2.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】2

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