【摘要】 本发明属于小麦谷粒中禾谷镰孢菌(Gibberella zeae，无性态Fusarium graminearum)的定量PCR(Real-time quantitative PCR)检测方法，专门用于特异性测定麦粒中禾谷镰孢菌侵染量。该法先建立禾谷镰孢菌的实时定量PCR检测的标准曲线，然后对待测麦粒提取DNA，进行实时定量PCR反应，根据所建立的标准曲线获得待测样品中该病原菌侵染量。整个过程只需6h，检测准确率达99％以上；具有快速、简便、准确、灵敏的特点，可用于更加科学地评估麦粒赤霉病病害严重度及有关防治技术的实际效果。 【专利类型】发明申请 【申请人】南京农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】210095 江苏省南京市卫岗1号南京农业大学科技处 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】玄武区 【申请号】CN201010247054.X 【申请日】2010-08-06 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101988121A 【公开公告日】2011-03-23 【公开公告年份】2011 【IPC分类号】C12Q1/68; C12Q1/06 【发明人】周明国; 陈长军; 王建新; 张艳军 【主权项内容】小麦谷粒中禾谷镰孢菌侵染量的定量检测方法，其特征在于采用实时定量PCR(Real‑time quantitative PCR)技术检测谷粒中禾谷镰孢菌菌丝的侵染量。谷粒中禾谷镰孢菌检测方法，共分三步：第一步：采用常规的苯酚·氯仿·异戊醇法，分别提取实验室培养的禾谷镰孢菌菌丝DNA和待测谷物样品DNA。第二步：运用禾谷镰孢菌特异性DON毒素合成关键基因Tri5(编码单端孢霉二烯合酶)的特异性检测引物和SYBR Green I为发光材料进行实时定量PCR反应，建立禾谷镰孢菌菌丝检测量的标准曲线。实时定量PCR反应体系及其扩增条件：禾谷镰孢菌菌丝检测量的标准曲线反应体系：dH2O(灭菌蒸馏水)                           9.5μLPlatinumTM SYBR Green qPCR SuperMix‑UDG    12.5μLTr5F(10μM)                                0.5μLTr5R(10μM)                                0.5μLROX Reference Dye                          1μLDNA模板                                    1μL                                                      总体积                                     25μL扩增条件：预热：        50℃    2min预变性：      95℃    2min              ↓变性：        95℃    15s退火：        60℃    30s延伸：        72℃    45s35个循环              ↓最后一步延伸：72℃    5min熔解温度：    59℃第三步：待测样品完成实时定量PCR反应后，应用第二步中已经建立好的标准曲线，计算出待测样品中禾谷镰孢菌的菌丝量。 【当前权利人】南京农业大学 【当前专利权人地址】江苏省南京市卫岗1号南京农业大学科技处 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000466007562R 【被引证次数】5 【被他引次数】5.0 【家族被引证次数】5

未经允许不得转载：http://www.zhongzhencnc.com/1785487900.html