【摘要】 本发明涉及生物技术领域，旨在提供一种用于乙型肝炎病毒四色荧光定量PCR检测的试剂盒及应用。本发明针对病毒S区序列设计扩增引物和4条特异性探针：定量探针，对应A-H型的保守区，用来定量总DNA；C型探针，对应C型特有序列，用来检测HBV基因型C型；YVDD探针，对应YVDD(GTG)突变位点；YIDD探针，对应YIDD(ATT)突变位点。试剂盒反应体系包含由特异性引物和探针配制的检测混合液、Taq酶、阴性和阳性对照。本发明用于检测的整个过程小于3小时，效率高，成本低，灵敏度和准确度高，能有效监测乙肝患者病毒载量和服用核苷类药物的疗效。。 【专利类型】发明授权 【申请人】浙江大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号 【申请人地区】中国 【申请人城市】杭州市 【申请人区县】西湖区 【申请号】CN201210290468.X 【申请日】2012-08-15 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103088151B 【公开公告日】2014-07-23 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103088151B 【授权公告日】2014-07-23 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12Q1/70; C12Q1/68; G01N21/64 【发明人】陈智; 符芳芳; 朱海红 【主权项内容】1.用于乙型肝炎病毒四色荧光定量PCR检测的试剂盒，其特征在于，该试剂盒含有两种引物及四种探针，各引物或探针的名称、DNA序列和荧光标记分别为：上游引物：5’-GCACTTGTATTCCCATCCCATCAT-3’；nt645-662, 18bp；下游引物：5’-AGCAAAGCCCAAAAGACCCACAAT-3’；nt982-1005, 24bp, antisense；定量探针5’-ROX-TCTGTACAACATCTTGAGTCCCTT-BHQ2-3’；nt768-791, 24bp；C型探针5’-CY5-TRAACCCTAATAAAACCAAACGTTGG-BHQ2-3’；nt836-861, 26bp；YVDD探针5’-VIC-CATCATCCACATARC-MGB-3’；nt751-765, 15bp, antisense；YIDD探针5’-NED-CCACATCATCAATATA-MGB-3’；nt754-769, 16bp, antisense；所述各引物、探针与buffer、MgCl2、含dUTP的dNTPs装于一个容器内构成PCR检测混合液mix；该试剂盒还包括Taq酶、UDG酶、阴性对照样品和阳性对照样品，其中阴性对照为确认HBV DNA阴性血清，阳性对照为含1.0E+06IU/ml HBV DNA目的基因片段的阳性样本；在利用所述引物及探针建立的25μL PCR反应体系中，各组分的终浓度为：10倍反应缓冲液buffer，1×；MgCl2，4.5mM；dNTPs，各0.2mM；dUTP，0.2mM；Taq酶，2.5U；UDG酶，0.1U；各条引物，各0.1μM；各条探针，各0.25μM；待测样品模板DNA, 5μL。 【当前权利人】浙江大学 【当前专利权人地址】浙江省杭州市西湖区浙大路38号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000470095016Q 【引证次数】13.0 【他引次数】13.0 【家族引证次数】14.0 【家族被引证次数】7

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