【摘要】 本发明公开了一种高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：从酿酒酵母基因组中PCR扩增出S-腺苷蛋氨酸合成酶基因sam2，连接至质粒pPIC9K中，得到真核表达载体pPIC9K-sam2，然后将其转化到巴斯德毕赤酵母；从毕赤酵母基因组中PCR扩增出胱硫醚β合成酶基因cbs，将其亚克隆至载体pMD19T中，得到重组载体T-cbs；将博莱霉素抗性基因zeocin导入重组载体T-cbs的胱硫醚β合成酶基因，得到cbs基因敲除质粒T-C-Z，酶切后获得cbs基因敲除片段C-Z；将片段C-Z转化至步骤1所得的包含pPIC9K-sam2的巴斯德毕赤酵母，得到敲除cbs基因又强化sam2基因的高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株。 【专利类型】发明授权 【申请人】浙江工商大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】310018 浙江省杭州市下沙高教园区学正街18号 【申请人地区】中国 【申请人城市】杭州市 【申请人区县】上城区 【申请号】CN201210012182.5 【申请日】2012-01-16 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103087934B 【公开公告日】2014-09-10 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103087934B 【授权公告日】2014-09-10 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12N1/19; C12N15/54; C12N15/81; C12N15/09; C12P19/40; C12R1/84 【发明人】于平 【主权项内容】1.高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株的构建方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)从酿酒酵母基因组中PCR扩增出S-腺苷蛋氨酸合成酶基因sam2，连接至质粒pPIC9K中，得到真核表达载体pPIC9K-sam2，然后将其转化到巴斯德毕赤酵母；(2)从毕赤酵母基因组中PCR扩增出胱硫醚β合成酶基因cbs，将其亚克隆至载体pMD19T中，得到重组载体T-cbs；将博莱霉素抗性基因zeocin导入重组载体T-cbs的胱硫醚β合成酶基因，得到cbs基因敲除质粒T-C-Z，酶切后获得cbs基因敲除片段C-Z；(3)将片段C-Z转化至步骤1 所得的包含pPIC9K-sam2的巴斯德毕赤酵母，得到敲除cbs基因又强化sam2基因的高产S-腺苷蛋氨酸的巴斯德毕赤酵母菌株。 【当前权利人】浙江工商大学 【当前专利权人地址】浙江省杭州市下沙高教园区学正街18号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】123300004700090180 【引证次数】2.0 【他引次数】2.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】3

未经允许不得转载：http://www.zhongzhencnc.com/1791488012.html