【摘要】 本发明提供一种快速定量检测土壤中有机磷农药残留的方法，利用在一定条件下，有机磷农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与有机磷农药浓度呈正相关的原理。正常情况下，胆碱酯酶催化神经传导代谢产物(乙酰胆碱或丁酰胆碱)水解，其水解产物与显色剂反应，产生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定反应前后吸光度的变化量，计算出抑制率，通过抑制率可以判断出样品中是否有高剂量的有机磷农药的存在。该法具有操作简便，检测速度快，不需昂贵的仪器，灵敏度高，重复性好，回收率高等诸多优点。 【专利类型】发明授权 【申请人】河南省科学院生物研究所有限责任公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】450000 河南省郑州市花园路28号 【申请人地区】中国 【申请人城市】郑州市 【申请人区县】金水区 【申请号】CN201210126308.1 【申请日】2012-04-27 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102628810B 【公开公告日】2014-11-19 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102628810B 【授权公告日】2014-11-19 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N21/78 【发明人】王继雯; 慕兰; 杨文玲; 甄静; 谢宝恩; 刘莹莹; 李冠杰; 周伏忠; 陈国参 【主权项内容】1.一种快速定量检测土壤中有机磷农药残留的方法，其特征在于，包括步骤：A、土壤样品的处理，包括：(1)有机磷农药污染土壤样品的处理：将含有机磷农药的风干土壤样品充分研磨后，过100目筛，取一支干净的试管，准确称取0.50g土样，加入2.5mL pH8.0磷酸缓冲液在混合仪上充分混匀3-5min，为待检土壤样品悬液；(2)空白土壤样品的处理：将不含农药的土样风干后，充分研磨后，过100目筛，准确称取0.50g空白土样，加入2.5mL pH8.0磷酸缓冲液在混合仪上充分混匀3-5min，为待检空白土样悬液；B、空白对照土样的测试：将上述待检空白土样悬液，加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上，然后6000r/min离心5min，取上清，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A0，加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液摇匀，然后检测、记录反应后的吸光度值，并计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A0；C、标准曲线的制作：另取5支干净的试管，按步骤A中空白土壤样品处理的方法制备待检空白土样悬液，分别向其中加入有机磷农药标品使其终浓度分别为0.01、0.1、1、10、100mg/mL，然后再分别加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液和0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上，然后6000r/min离心5min，取上清，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A1，加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液后充分摇匀，然后检测、记录反应后的吸光度值，计算出反应前的吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A1；然后将本步骤C中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A1的平均值，并计算出上述0.01、0.1、1、10、100mg/mL的不同浓度的有机磷农药溶液对酶的抑制率，然后分别对有机磷农药标准品的不同浓度取log10，以对有机磷农药标准品的不同浓度取log10为底得到的对数值为横坐标，以其抑制率为纵坐标，并作出标准曲线，求出该标准曲线的回归方程；D、有机磷农药污染土样的测定：取一支干净的试管，按步骤A中污染土壤样品处理的方法制备待检土壤样品悬液，再加入0.1mL丁酰胆碱酯酶溶液0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上，然后6000r/min离心5min，取上清，用分光光度计在412nm处测定反应前的吸光度值A2，加入0.1mL底物碘化硫代丁酸胆碱溶液后充分摇匀，然后检测、记录反应后的吸光度值，并计算出反应前吸光度值与反应后的吸光度值的变化量△A2；然后将本步骤D中的前述过程重复做三次，并求得变化量△A2的平均值，并计算出其抑制率，将该抑制率代入所述标准曲线的回归方程，就可以计算出其农药残留。。： 【当前权利人】河南省科学院生物研究所有限责任公司 【当前专利权人地址】河南省郑州市花园路28号 【专利权人类型】其他有限责任公司 【统一社会信用代码】914101054158024863 【引证次数】1.0 【他引次数】1.0 【家族引证次数】1.0 【家族被引证次数】14

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