【摘要】 本发明提供一种黄连木芽染色体制片的方法，采用0.002mol/L的8-羟基喹啉溶液进行低温预处理；卡诺氏固定液固定；2%纤维素酶30℃水浴锅中酶解40min，再用卡诺氏固定液固定20min，1mol/L盐酸60℃水浴中解离5min，用蒸馏水漂洗；将组织块切割成碎块，卡宝品红染色剂染色15min；压片法制片，镜检，在OLYMPUSCX/MD50显微摄影装置下进行显微照相。本发明的制片方法操作简单方便，确定了进行黄连木芽染色体制片的最佳取材时间、取材部位以及制片方法，使获得的染色体分散均匀，背景浅，易于观察，得出的染色体数目准确度高。 【专利类型】发明授权 【申请人】河南科技大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】471000 河南省洛阳市涧西区西苑路48号 【申请人地区】中国 【申请人城市】洛阳市 【申请人区县】涧西区 【申请号】CN201210299270.8 【申请日】2012-08-22 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102830002B 【公开公告日】2014-10-22 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102830002B 【授权公告日】2014-10-22 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N1/30 【发明人】施江; 王小燕; 王晓凌; 辛莉; 高双成; 史国安 【主权项内容】1.一种黄连木芽染色体制片的方法，其特征是： A、取材：每年四月中上旬上午9-10时取黄连木树上新生的嫩芽，沿嫩芽腹线切割成两部分； B、预处理：将切割好的嫩芽用蒸馏水清洗干净，吸水纸吸干水分后放入浓度为0.002 mol/L的8-羟基喹啉溶液中，在暗处预处理2 h 50 min； C、固定：将预处理后的嫩芽用吸水纸吸干，除去残余的预处理液后放入卡诺氏Ⅰ固定液中，在4℃冰箱中固定2 h 20 min，固定好后的材料转入70%乙醇中保存备用； D、酶解：将固定好的嫩芽用蒸馏水漂洗3次，每次10 min，吸干水分后放入2%纤维素酶溶液中，在30℃水浴锅中酶解40 min； E、再固定：将酶解后的嫩芽再用卡诺氏Ⅰ固定液固定20 min； F、解离：将再固定后的材料放入1 mol/L盐酸溶液中，在60℃水浴锅中解离5 min，解离后用蒸馏水漂洗2次，每次5 min； G、染色：将解离后的嫩芽置于载玻片上，取呈现出乳白色的组织块，用吸水纸吸干组织块周围的水分，用解剖刀将取下的组织块切割成碎块，滴入1-2滴卡宝品红染色剂，染色15 min，然后用蒸馏水漂洗； H、压片：将材料重新移至载玻片上，捣碎组织块，并使其均匀分散在载玻片上，盖上盖玻片，置于酒精灯上微热，使细胞进一步软化和增强染色，静置片刻，在盖玻片上放一张滤纸，并用左手食指压紧，右手持带橡皮的铅笔的橡皮头端先轻后重的敲击盖片，使细胞压平，然后放置在平整的桌面上，用拇指压紧盖玻片； I、镜检：将压片置于生物显微镜下观察，选择染色体分散、清晰的细胞在显微摄影装置下进行显微照相，以便进行染色体计数，同时用记号笔在载玻片和盖玻片上分别做记号。 【当前权利人】河南科技大学 【当前专利权人地址】河南省洛阳市涧西区西苑路48号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】124100004165265089 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】9

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