【摘要】 本发明公开了一种不同胞质类型抗咪唑乙烟酸除草剂谷子雄性不育系的培育方法，其包括以下步骤：(1)谷子育种材料细胞质类型的划分；(2)桥梁父本的创制；(3)不同胞质类型抗咪唑乙烟酸除草剂三交1代的创制；(4)不同胞质类型的抗咪唑乙烟酸谷子雄性不育系的创制。通过该方法培育出不同胞质类型不育系，不但丰富了现有不育材料的胞质类型，为培育不同胞质类型的杂交种奠定基础，可解决以前由于胞质类型单一，容易遭受专化性病害侵染的难题，避免由于细胞质专化性病害的侵染给农业生产带来的巨大损害。而且本发明培育的谷子不育系还具有抗咪唑乙烟酸特性，解决了不育系繁种过程中除草困难的难题。 【专利类型】发明授权 【申请人】河北省农林科学院谷子研究所 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】050035 河北省石家庄市国家高新技术产业开发区恒山街162号 【申请人地区】中国 【申请人城市】石家庄市 【申请人区县】裕华区 【申请号】CN201210203605.1 【申请日】2012-06-20 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102771379B 【公开公告日】2014-05-14 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102771379B 【授权公告日】2014-05-14 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】A01H1/02; G06F19/14; G16B10/00 【发明人】刘正理; 夏雪岩; 程汝宏; 师志刚; 张婷 【主权项内容】一种不同胞质类型抗咪唑乙烟酸除草剂谷子雄性不育系的培育方法，其特征在于包括以下步骤：I.谷子育种材料细胞质类型的划分；II.桥梁父本的创制；III.不同胞质类型抗咪唑乙烟酸除草剂三交1代的创制；IV.不同胞质类型的抗咪唑乙烟酸谷子雄性不育系的创制；步骤I谷子育种材料细胞质类型的划分包括如下步骤：(1)细胞质进化树的构建；(2)母本衍生进化图的构建；(3)特定遗传相似系数的确定及细胞质的分子聚类；(4)谷子育种材料细胞质类型的确定；步骤I谷子育种材料细胞质类型的划分中的步骤(1)所述的细胞质进化树的构建包括如下步骤：①叶片组织的培养与获取：将谷子育种材料的种子种于育苗盘中获得谷子幼苗，于4叶期分别剪取育种材料的叶片组织；②全基因组DNA的提取：采用CTAB法提取步骤①中叶片组织的全基因组DNA；③PCR扩增：采用20μl反应体系，利用线粒体特异引物对步骤②提取的基因组DNA进行37个反应循环PCR扩增；④多态性检测：利用凝胶电泳法对步骤③中线粒体的PCR扩增产物进行多态性检测；⑤细胞质进化树的生成：对步骤④中电泳图谱上清晰且可重复出现的条带记为“1”，同一位置没有出现的带记为“0”，生成由“1”和“0”组成的原始矩阵，用NTSYS-pc2.1软件进行数据分析，用SAHN程序中的UPGMA方法进行聚类分析，生成细胞质的进化树；步骤I谷子育种材料细胞质类型的划分中的步骤(2)所述的母本衍生进化图的构建为：利用系谱追踪法将谷子育种材料按上文中步骤I-步骤(1)中所构建进化树的排列顺序进行纵向排列，通过逐代向上追踪育种材料的母本，直到追踪到农家品种为止，依据系谱将同一母本衍生的育种材料按照衍生关系逐步连接起来，形成母本衍生进化图；步骤I谷子育种材料细胞质类型的划分中的步骤(3)所述的特定遗传相似系数的确定及细胞质的分子聚类为：将上文步骤I-步骤(2)中构建的谷子育种材料的母本衍生进化图与上文步骤I-步骤(1)中构建的谷子育种材料的胞质进化树相结合，并进行比较分析，确定基本能将同一母本衍生系统聚为一个分枝的特定遗传相似系数，在该遗传相似系数下对上文步骤I-步骤(1)中构建的谷子育种材料的胞质进化树进行纵切，将谷子育种材料进行胞质的分子聚类，分子聚类中每个分枝代表一个胞质类群；步骤I谷子育种材料细胞质类型的划分中的步骤(3)所述的特定遗传相似系数的确定及细胞质的分子聚类中特定遗传相似系数为0.74，在该遗传相似系数下对上文步骤I-步骤(1)中所述的细胞质进化树的构建中所构建的进化树进行纵切，将其纵切为7个分枝，每个分枝代表1个胞质的分子类群，这样将胞质进化树纵切为7个类群，纵切结果与母本衍生进化图一致性达98.2％；步骤I谷子育种材料细胞质类型的划分中的步骤(4)所述的谷子育种材料细胞质类型的确定是将上文步骤I-步骤(3)中的分子聚类图与上文步骤I-步骤(2)中构建的母本衍生进化图结合，将胞质分子聚类图中的每个分枝与对应的母本衍生系统逐一进行对比，确定每个类群材料的细胞质类型，完成对谷子育种材料细胞质类型进行划分；步骤II所述的桥梁父本的创制为：以谷子高度雄性核不育系材料做母本，以谷子抗咪唑乙烟酸材料做父本配置杂交组合，成熟后收获杂种1代种子；种植杂种1代种子于3-5叶期，喷施咪唑乙烟酸除草剂杀死假杂种，正常成活的植株为含有不育基因和抗咪唑乙烟酸基因的真杂种，即桥梁父本；步骤III所述的不同胞质类型抗咪唑乙烟酸除草剂三交1代的创制为：以上述步骤I-步骤(4)中划分的不同胞质类型的谷子育种材料为母本，以上述步骤II中创制的桥梁父本为父本配制不同胞质三交组合，获得不同胞质类型抗咪唑乙烟酸三交1代种子；步骤IV所述的不同胞质类型的抗咪唑乙烟酸谷子雄性不育系的创制包括如下步骤：①三交1代假杂种和不抗除草剂单株的去除：种植上述步骤III中获得的三交1代种子，于3-5叶期喷施咪唑乙烟酸除草剂，杀除假杂种和其中不抗咪唑乙烟酸的杂交后代，存活下来的为抗咪唑乙烟酸除草剂的杂合可育株和纯合可育株，抽穗期全部套袋自交，蜡熟期从中选择优良单株作为三交2代种子；②后代的选择：种植步骤①中获得的三交2代种子，于3-5叶期喷施咪唑乙烟酸除草剂，杀除其中分离的不抗咪唑乙烟酸除草剂的不育株和可育株，存活下来的为抗咪唑乙烟酸除草剂的不育株和抗咪唑乙烟酸除草剂的可育株两种类型，抽穗期选择其中的不育株，全部套袋，蜡熟期按穗行从中选择优良不育单株，作为三交3代种子供下代继续选择；如此连续经过4-6代的套袋自交和选择，可获得稳定的不同胞质类型的抗咪唑乙烟酸谷子雄性不育系。。 【当前权利人】河北省农林科学院谷子研究所 【当前专利权人地址】河北省石家庄市国家高新技术产业开发区恒山街162号 【统一社会信用代码】12130000401701975J 【引证次数】3.0 【他引次数】3.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】1

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