【摘要】 一种通过发根农杆菌介导提高枣树对枣疯病抗性的方法，以感染枣疯病的枣树组培苗的茎段为材料，用发根农杆菌进行侵染，在再生出的组培苗中筛选转健组培苗，然后继续培养脱菌，对转健组培苗进行分子检测确定不携带枣疯病病原体的转化苗，利用微嫁接技术对转化苗的抗病性进行检测验证，最终得到对枣疯病抗病性显著提高的枣树抗性苗。该方法简单易行，可在几个月内就获得对枣疯病抗性显著提高的枣组培苗。 【专利类型】发明授权 【申请人】河北农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】071001 河北省保定市灵雨寺街289号 【申请人地区】中国 【申请人城市】保定市 【申请人区县】莲池区 【申请号】CN201210162195.0 【申请日】2012-05-24 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102676577B 【公开公告日】2014-04-16 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102676577B 【授权公告日】2014-04-16 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12N15/82; A01H5/00 【发明人】刘孟军; 赵锦; 郝征 【主权项内容】1.一种通过发根农杆菌介导提高枣树对枣疯病抗性的方法，其特征在于包括以下步骤： (1)发根农杆菌侵染与转健苗的获得 将感染枣疯病的枣组培苗嫩茎剪成长约1cm的茎段，用OD600为0.6-1.0的发根农杆菌侵染5-15min，然后转入pH值5.8的共培养基MS+5.5g/L琼脂+30g/L蔗糖+200μΜ乙酰丁香酮中共培养3-7d，再转入pH值5.8的筛选培养基MS+5.5g/L琼脂+30g/L蔗糖+100mg/L头孢曲松钠中，在25±2℃，光照/黑暗为14/10h的条件下培养60d，筛选出枣疯病症状消失的转健苗； (2)转健苗的脱菌继代 将转健苗转入添加头孢曲松钠50-100mg/L、pH值5.8的MS+5.5g/L琼脂+30g/L蔗糖+0.2mg/L BA+0.1mg/L IBA培养基中继续培养，每20d换一次培养基，并逐渐降低头孢曲松钠的浓度，直到转健苗完全脱除发根农杆菌，获得脱菌转健苗； (3)脱菌转健苗的检测 提取脱菌转健苗的基因组DNA进行rolC、rolD、tms基因的PCR检测和枣疯病病原体的检测，筛选出携带发根农杆菌rolC、rolD、tms基因而不携带枣疯病病原体的转化苗； (4)转化苗对枣疯病抗性的鉴定 采用组培微嫁接方法，将待鉴定的转化苗嫁接到疯组培苗上，嫁接苗在pH值5.8的MS+30g/L蔗糖+8g/L琼脂培养基中进行培养，观察嫁接苗生长和发病情况，不发病的转化苗说明其抗性得到了提高，即为抗性苗。 【当前权利人】河北农业大学 【当前专利权人地址】河北省保定市莲池区灵雨寺街289号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12130000401707023F 【引证次数】1.0 【自引次数】1.0 【家族引证次数】1.0 【家族被引证次数】4

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