【摘要】 本发明公开了一种芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种远缘杂交后代的分子鉴定方法，属生物技术领域。通过提取栽培种(Sesamum indicum L., 2n=26)、野生种(Sesamum radiatum, 2n=64)及杂交后代F1的基因组DNA，进行PCR扩增和凝胶电泳检测，根据是否能够同时扩增出亲本的特异性条带判定远缘杂交F1代的真假。本发明建立的芝麻远缘杂交后代的分子鉴定方法，解决了芝麻远缘杂交育种研究过程中的远缘杂种鉴定周期长、准确率低等难题，填补了我国芝麻远缘杂交育种技术的空白。利用该方法可以高效快速地鉴定芝麻远缘杂交后代F1，为芝麻抗病新品种育种奠定了材料和技术基础。 【专利类型】发明授权 【申请人】河南省农业科学院 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】450002 河南省郑州市金水区农业路1号 【申请人地区】中国 【申请人城市】郑州市 【申请人区县】金水区 【申请号】CN201210318496.8 【申请日】2012-08-31 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102965431B 【公开公告日】2014-09-24 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102965431B 【授权公告日】2014-09-24 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12Q1/68; C12N15/11 【发明人】张海洋; 苗红梅; 张体德; 魏利斌; 李春; 琚铭; 王慧丽 【主权项内容】1.芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种远缘杂交后代的分子鉴定方法，其特征在于，具体步骤如下：(1)挑选饱满健康的芝麻栽培种与Sesamum radiatum野生种种子，6月播种后于7月下旬植株进入花期，进行人工授粉杂交，采用组织培养方法对杂交后代幼胚进行培养，获得远缘杂交F1后代；(2)提取步骤(1)中芝麻栽培种、Sesamum radiatum野生种及杂交后代F1基因组DNA，作为模板备用；(3)将步骤(2)提取的DNA模板应用于PCR反应体系，运行PCR扩增程序，在引物对HS209的引导下，得到PCR反应产物；(4)将步骤(3)的PCR反应产物进行凝胶电泳检测，检测结果有栽培种特异性条带210bp和野生种特异性条带200bp及230bp的为真杂种；其余则为假杂种；所述的引物对HS209为：正向引物序列：5’-GCAAGAAGCCGACATGTTTA-3’，反向引物序列：5’-ACTCCAATTCCTCCACCAAG-3’；所述的PCR反应体系为：DNA模版50ng，10×Buffer1μL，10mmol·L-1dNTPs0.2μL，10μg·L-1引物对HS2091μL，2.5U·μL-1Taq DNA聚合酶0.5μL，加入无菌超纯水至终体积10μL；所述的PCR扩增程序为：94℃变性3min，94℃变性1min，58℃退火45s，72℃延伸60s，30个循环，72℃总延伸10min；4℃保存。 【当前权利人】河南省农业科学院 【当前专利权人地址】河南省郑州市金水区农业路1号 【统一社会信用代码】12410000415803948G 【引证次数】1.0 【他引次数】1.0 【家族引证次数】1.0 【家族被引证次数】3

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