【摘要】 本发明公开了一种单核增生李斯特菌的环介导等温扩增的检测方法。本发明针对单核增生李斯特菌设计和筛选了一套特异性检测引物，采用LAMP对待检测食物样品进行检测，确认是否存在单核增生李斯特菌的特异性基因片段，进而确定待检测样品是否受到单核增生李斯特菌污染。此外，在进行LAMP检测前，本发明还通过叠氮溴化丙锭处理食物样品以去除死菌的干扰，从而在随后进行的LAMP检测中只会有活菌的检测信号。本发明的检测方法具有灵敏度高、特异性强、检测时间短，不需要昂贵的实验仪器，操作过程简单，并且不会被食物样品中残留的DNA或死菌的干扰，特别适合在野外和基层检测机构和食品企业中自检使用。 【专利类型】发明授权 【申请人】南昌大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】330031 江西省南昌市红谷滩新区学府大道999号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南昌市 【申请人区县】新建区 【申请号】CN201210177173.1 【申请日】2012-06-01 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102719535B 【公开公告日】2014-02-26 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102719535B 【授权公告日】2014-02-26 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12Q1/68; C12R1/01 【发明人】魏华; 徐锋; 杨友均; 郭亮; 许恒毅; 赖卫华; 熊勇华 【主权项内容】1.一种快速检测食品中活的单核增生李斯特菌(Listeria monocytogenes)的检测方法，其特征在于包括如下步骤：(1)取食物样本，加缓冲液碾磨制成匀浆液，离心去除大的食物残渣，取上清得菌悬液，过程均为无菌操作；(2)取制备好的菌悬液加叠氮溴化丙啶溶液，使叠氮溴化丙啶的终质量浓度为3 μg/mL，混匀后室温避光培养3~8min，卤素灯曝光，光照交联时样品置于冰上，交联后的悬浮液离心，所得沉淀用沸水浴法提取DNA；(3)取DNA，进行LAMP反应，LAMP反应所用的引物为：上游外引物F3(5’→3’)： AAGCTGCTTTTGATGCTG下游外引物B3(5’→3’)： TCGATTAAAAGTAGCGCCTT上游内引物FIP(5’→3’)：CGGCTTTGAAGGAAGAATTTTTGAT-CGTAAGCGGAAAATCTGTC下游内引物BIP(5’→3’)：TACGGAGGTTCCGCAAAAGA-TTTTCAAAATATCGCGTAAGTCTC上游环引物LF(5’→3’)： ATTTGTTAGTTCTACATCACCTG下游环引物LB(5’→3’) : AAGTTCAAATCATCGACGGC(4) LAMP反应结束后，取反应液检测单核增生李斯特菌存在。。 【当前权利人】南昌大学 【当前专利权人地址】江西省南昌市红谷滩新区学府大道999号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12360000491015556U 【家族引证次数】1.0 【家族被引证次数】10

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