【摘要】 本发明公开了一种白酒中多种生物胺的定性与定量方法，属于白酒分析检测技术领域。本发明利用液液萃取富集白酒中的生物胺，气相定性与液相定量均需要衍生，气相选用的衍生剂为TFAA，液相采用的衍生剂为丹磺酰氯柱前衍生。本发明建立的方法在白酒中首次定性到9种生物胺，定量方法检测限可低至10μg/L左右，线性相关系数大于0.99，回收率为80.19%~104.05%，相对标准偏差在4%以内。说明白酒中的生物胺可以利用该方法检测，可行性好，精密度高。 【专利类型】发明授权 【申请人】江南大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学生物工程学院 【申请人地区】中国 【申请人城市】无锡市 【申请人区县】滨湖区 【申请号】CN201210400028.5 【申请日】2012-10-20 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102914606B 【公开公告日】2014-06-25 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102914606B 【授权公告日】2014-06-25 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N30/02; G01N30/88; G01N30/89 【发明人】范文来; 徐岩; 温永柱 【主权项内容】1.一种白酒中多种生物胺BAs的定性与定量方法，其特征在于应用气相色谱-串联质谱联用技术GC-MS定性与紫外检测-反相高效液相色谱技术RP-HPLC定量，利用液液萃取富集白酒中的生物胺，GC-MS定性选用的衍生剂为三氟乙酸酐TFAA，RP-HPLC定量采用的衍生剂为丹磺酰氯； (1)GC-MS定性 分离与衍生：375mL白酒浓盐酸酸化调pH 1.5，利用旋转蒸发仪40℃、抽真空旋蒸到50mL，旋蒸时要加玻璃珠防止爆沸；剩余液体用二氯甲烷萃取两次，萃余液再旋蒸2~3min，调碱性pH11，用60mL丁醇萃取三次；溶剂层先用等体积1mol/L的NaOH洗，然后用两倍体积1mol/L的HCl洗，HCl洗脱溶液再用丁醇萃取一次，剩余HCl溶液减压浓缩至干燥盐；干燥盐用衍生剂用量为5mL三氟乙酸酐TFAA衍生，衍生反应不能含有水，要严格封闭，55℃，水浴30min；然后用20mL饱和NaHCO3洗，加入固体NaHCO3直到溶液变碱性，然后用15mL乙醚萃取，乙醚溶液用20mL饱和NaHCO3洗，再用超纯水洗，加入无水硫酸钠干燥过夜，氮吹至100μL，立刻用GC-MS定性分析； 气相色谱条件：FFAP 柱60m×0.25mm×0.25μm；气相色谱进样口和检测器温度为250℃，载气为氦气，流速2mL/min；进样量1μL，不分流进样；色谱柱升温程序：初温50℃，保持2min，以4℃/min升至230℃，保持15min； 质谱条件：EI电离源；电子能量：70eV；离子源温度：230℃；扫描范围：35~350amu； (2)RP-HPLC定量 分离与衍生：5mL白酒，加入1.5g NaCl饱和，加入3mL正丁醇 : 氯仿体积比1 : 1的混合溶剂萃取，用pH 13的Na2CO3和NaOH缓冲溶液调pH至11.5，涡旋仪旋转震荡4min，收集有机相，重复萃取两次；加入1mL 1mol/L HCl混匀，氮气吹干，加入2mL 0.1mol/L HCl溶解，加入溶剂为丙酮的9mg/mL丹磺酰氯衍生剂2mL，调pH为8.6，丹磺酰氯衍生剂的体积用量与衍生前样品体积相同，震荡混匀后，40℃水浴避光衍生1h；衍生结束后，要加入200μL氨水中断反应，加入3mL乙酸乙酯，重复萃取三次，合并萃取液，氮气吹干，加入1mL乙腈溶解，0.45μm有机滤膜过滤，进样； 液相色谱条件：Agilent C18色谱柱4.6×250mm、5μm，检测波长为254nm，柱温为20℃，进样量10μL，利用外标法峰面积定量，梯度洗脱，流速为0.4mL/min，流动相A为乙腈，B为超纯水，洗脱程序：0~6min，A为30%；6~12min，A为30%~80%；12~25min，A为80%~85%；25~32min，A为85%~30%。 【当前权利人】江南大学 【当前专利权人地址】江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学生物工程学院 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】1210000071780177X1 【家族被引证次数】7

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