【摘要】 一种测定赭曲霉毒素A的适配体传感器的构建方法，属于生物传感器检测技术领域。本发明包括：链霉亲和素包被PCR管，适配体与其部分互补的DNA片段杂交并固定在PCR管表面，适配体传感器的构建。本发明提供了一种与赭曲霉毒素A高特异性高亲和力结合的单链DNA适配体和部分互补于适配体的DNA片段，通过适配体与赭曲霉毒素A的识别结合，诱导适配体构象的改变从而导致互补于适配体的DNA片段释放，以互补于适配体的片段作为PCR扩增模板，通过扩增后的荧光信号对赭曲霉毒素A进行检测。本发明方法能实现对赭曲霉毒素A超灵敏检测，检测限低、检测灵敏度高、特异性好，为痕量赭曲霉毒素A以及其他有害物质的检测提供了一种有效的方法。 【专利类型】发明授权 【申请人】江南大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学食品学院 【申请人地区】中国 【申请人城市】无锡市 【申请人区县】滨湖区 【申请号】CN201210400031.7 【申请日】2012-10-20 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102912020B 【公开公告日】2014-02-19 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102912020B 【授权公告日】2014-02-19 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12Q1/68; G01N21/64 【发明人】胥传来; 徐丽广; 匡华; 马伟; 刘丽强; 宋珊珊 【主权项内容】1.一种测定赭曲霉毒素A的适配体传感器的构建方法，其特征在于包括：链霉亲和素包被PCR管，适配体与其部分互补的DNA片段杂交并固定在PCR管表面，完成适配体传感器的构建；具体步骤为：(1)链霉亲和素包被PCR管首先将PCR管用50μL质量浓度0.8%的戊二醛溶液在37℃包被5h，然后用超纯水将PCR管洗涤三次，每次3min；再用pH7.2、0.01M的碳酸盐缓冲液稀释的12.5ng/mL的链霉亲和素包被PCR管，每管30μL在37℃孵育2h，孵育结束后再用上述碳酸盐缓冲液洗涤三次，每次3min，以去除未结合的链霉亲和素；(2)适配体与其部分互补的DNA片段杂交并固定在PCR管表面用含750mM NaCl、75 mM C6H5Na3O7、pH 8.0杂交缓冲液将适配体和部分互补于适配体的DNA片段分别稀释到50nM和100nM，并将两者以1 : 1的体积比充分混合，将混合液于每个PCR管加入30μL，并在37℃条件下孵育40min，以使互补双链充分杂交并结合到PCR管表面，完成适配体传感器的构建；所述单链DNA适配体片段和部分互补于适配体的DNA片段序列分别为：适配体 : 5’-GATCGGGTGT GGGTGGCGTA AAGGGAGCAT CGG-biotin-3’，与适配体部分互补的DNA片段 : 5’-CCCACACCCG ATCGGGAAAATGCAAGAAGA AGTCATTAGT CCTAGACAAC GTTACTATAA CGTGAATGTA ATGAACCTAC AAGACCTTCC AGATTTTTCG GC-3’。 【当前权利人】江南大学 【当前专利权人地址】江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学食品学院 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】1210000071780177X1 【被引证次数】1 【被他引次数】1.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】22

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