【摘要】 本发明涉及表达高致病性禽流感病毒H5亚型血凝素蛋白的重组嗜酸乳杆菌，属于生物技术基因工程领域。本发明成功构建了高致病性禽流感病毒H5亚型血凝素重组乳酸杆菌表达质粒pLEM415-PHA1，并成功电击转化入嗜酸乳杆菌4356。高致病性禽流感病毒H5亚型血凝素蛋白在重组嗜酸乳杆菌4356内可以被成功表达，经Western-blot验证具有良好的抗原性。重组嗜酸乳杆菌4356有望开发成预防高致病性禽流感的基因工程口服疫苗。 【专利类型】发明申请 【申请人】南京农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】210095 江苏省南京市卫岗1号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】玄武区 【申请号】CN201010544665.0 【申请日】2010-11-16 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101985630A 【公开公告日】2011-03-16 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN101985630B 【授权公告日】2013-05-01 【授权公告年份】2013.0 【IPC分类号】C12N15/74; C12N15/44; C12N15/66; C12N1/21; C12R1/23 【发明人】杨倩; 王志胜; 庾庆华 【主权项内容】高致病性禽流感病毒H5亚型血凝素蛋白的重组表达质粒，是由以下方法构建而成：(1)高致病性禽流感病毒H5亚型血凝素HA1，其序列为SEQ ID NO.1；乳酸脱氢酶LDH的启动子基因P，其序列为SEQ ID NO.4，其克隆过程如下：设计启动子引物P1、P2：P1 5’‑TAAGGTACCTACTGAGAAGTTGCTC‑3’P2 5’‑TAACTCGAGGCCGACGAGGATAACT‑3’5’端分别引入KpnI和XhoI限制性内切酶酶切位点，TAA为保护碱基，以质粒pRV85为模板，常规PCR克隆乳酸脱氢酶启动子P；设计高致病性禽流感病毒血凝素HA1引物HAF1、HAR2：HAF1 5’‑TAACTCGAGAAAATGGAGAAAATAGTGCTTC‑3’HAR2 5’‑TAAGATATCCTACAATCTGAACTCACAAATT‑3’5’端分别引入XhoI和EcoRV限制性内切酶酶切位点，TAA为保护碱基，以质粒pCI‑H5HA为模板，常规PCR克隆高致病性禽流感血凝素基因HA1；(2)重组表达质粒pLEM415‑PHA1的构建利用酶切连接技术，分别将乳酸脱氢酶启动子P和高致病性禽流感血凝素HA1目的片段连接在大肠‑乳酸杆菌穿梭质粒pLEM415上，得到重组表达质粒pLEM415‑PHA1；采用限制性内切酶KpnI、XhoI、EcoRV，分别用双酶切验证。 【当前权利人】南京农业大学 【当前专利权人地址】江苏省南京市卫岗1号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000466007562R 【引证次数】2.0 【被引证次数】2 【他引次数】2.0 【被自引次数】2.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】2

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