【摘要】 本发明提供了一种快速筛选枳壳中具脂肪酶抑制活性的化合物的方法，采用磁珠分离与液相色谱－质谱联用相结合的技术快速筛选枳壳中具脂肪酶抑制活性的化合物，与传统方法相比，与现有方法相比，能够从混合物中快速筛选并鉴定具有潜在脂肪酶抑制活性的化合物，进一步分离制备该类目标化合物，进行活性验证，大大减少了分离有效成分的盲目性，提高了活性筛选效率。该筛选过程无须制备分离化合物，显著提高了筛选效率、缩短了筛选时间。此外，本筛选方法具有快速、准确、重现性好等的特点。可推广用于天然药物或中药混合物中具有脂肪酶抑制活性的化合物的快速筛选。本发明方法获得的具脂肪酶抑制活性的化合物可在制备减肥及降脂药物中应用。 【专利类型】发明授权 【申请人】浙江大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】310027 浙江省杭州市西湖区浙大路38号 【申请人地区】中国 【申请人城市】杭州市 【申请人区县】西湖区 【申请号】CN201210304833.8 【申请日】2012-08-25 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102841150B 【公开公告日】2014-04-16 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102841150B 【授权公告日】2014-04-16 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N30/02 【发明人】程翼宇; 王毅; 张玉峰 【主权项内容】1.一种磁珠分离筛选具脂肪酶抑制活性化合物的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：(1)键合脂肪酶的磁珠制备：(a)磁珠活化：取磁珠使用2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液清洗后加入1-乙基-3-(3-二甲氨丙基)碳二亚胺盐酸盐溶液和N-羟基琥珀酰亚胺溶液混合均匀，孵育活化30min后移去上清液，并用2-(N-吗啡啉)乙磺酸溶液清洗；(b)磁珠键合：在活化磁珠上，加入含脂肪酶的乙磺酸溶液，震荡混合均匀，在室温孵育30 min进行包被，移去上清液，再用三羟甲基氨基甲烷缓冲液清洗包被的磁珠，弃去清洗液，待用；(2)键合磁珠质量考察：将制备的键合磁珠分散在磷酸盐缓冲液中，使用扫描式电子显微镜对空白磁珠、脂肪酶键合磁珠的表面分别分析，检查磁珠键合情况；采用傅里叶变换红外光谱仪，测定空白磁珠、脂肪酶、脂肪酶键合磁珠的红外光谱，检查酶结合情况；(3)筛选具脂肪酶抑制活性的化合物：(a)具脂肪酶抑制活性化合物的初筛：取100 μl枳壳提取物水溶液2份，分别加到180 μl分散于磷酸盐缓冲液的键合脂肪酶磁珠和空白磁珠中，放在振荡器上混匀，孵育，弃去上清液，再加入纯水清洗3次，弃去清洗液，最后使用含10%乙腈水溶液洗脱，吸取洗脱液备用，取空白磁珠和酶键合磁珠的洗脱液进行液相色谱-质谱联用分析，记录峰面积；(b)目标化合物获取及活性验证：采用常规柱色谱分离技术分离获取目标化合物群，再采用制备液相色谱分离、纯化目标化合物或购置相对应的目标化合物标准品；采用酶抑制活性实验验证纯化的目标化合物是否具有脂肪酶抑制活性，计算其半数抑制浓度。 【当前权利人】浙江大学 【当前专利权人地址】浙江省杭州市西湖区浙大路38号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000470095016Q 【家族引证次数】1.0 【家族被引证次数】4

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