【摘要】 本发明涉及用于检测猪链球菌2型的基因芯片的制备及其应用方法，可有效解决现有检测设备及方法耗时长，投入大的问题，其技术方案是：设计并合成引物和探针，用灭菌水溶解合成好的探针，用基因芯片点样仪按预先设定好的程序在醛基化基片上接触式点样，制备用于检测猪链球菌2型的基因芯片，其使用方法是，提取待测猪链球菌2型细菌的基因组DNA，采用不对称PCR制备杂交用PCR产物，与制备好的基因芯片杂交，经洗涤与干燥后，将芯片置于激光共聚焦扫描仪上扫描，分析结果，本发明操作简便易行，省去了已点样芯片的水化处理和预杂交步骤，杂交只需半小时，大大节省了时间，采用5μm/L的探针浓度就可以达到信号强度，检测成本低，可用于大规模检测。 【专利类型】发明授权 【申请人】郑州牧业工程高等专科学校 【申请人类型】学校 【申请人地址】450011 河南省郑州市金水区北林路16号 【申请人地区】中国 【申请人城市】郑州市 【申请人区县】金水区 【申请号】CN201210064682.3 【申请日】2012-03-13 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103014144B 【公开公告日】2014-10-08 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103014144B 【授权公告日】2014-10-08 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12Q1/68; C12Q1/14; G01N21/64; C40B50/06 【发明人】李文刚; 刘玲玲; 唐桂芬; 张春霞; 吴凤笋; 程亚楼 【主权项内容】1.一种用于检测猪链球菌2型的基因芯片的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)设计引物和探针：以猪链球菌2型的cps2J基因序列为靶序列，设计特异性引物和探针，上游引物：5’-TGGAATACGCAGAGCAAGAT-3’，下游引物：5’Cy3-AGCAAGTAACCCTCCCG ACA-3’，探针：5’NH2-TTTTTTTTTTTTTTTT-ACGGTATCAAAAATAGCACAGCAAA-3’，在下游引物5’端用Cy3进行荧光标记，探针的5’端进行氨基化修饰，修饰氨基和探针之间加上16个T；(2)按常规方法对引物和探针进行合成；(3)基因芯片的制备：用灭菌水溶解合成好的探针，用基因芯片点样仪在醛基化基片上接触式点样，点样完毕后将芯片静置于25-30℃烘箱干燥过夜8-12小时；所述的引物浓度为20μM/L；所述探针浓度为5μM/L —20μM/L。 【当前权利人】郑州牧业工程高等专科学校 【当前专利权人地址】河南省郑州市金水区北林路16号 【引证次数】4.0 【他引次数】4.0 【家族引证次数】4.0 【家族被引证次数】7

未经允许不得转载：http://www.zhongzhencnc.com/1791233522.html