【摘要】 本发明公开了一种鸭病毒性肝炎免疫刺激复合物，具体是将病毒性肝炎病毒接种鸡胚，收集尿囊液，并在单层鸭胚成纤维细胞中培养，获得的鸭病毒性肝炎病毒含量≥107EID50/0.1mL，然后将此病毒液于蔗糖垫上，离心，收集样品层和10%的蔗糖层，加入皂苷QuilA和脂类混合物，进行透析，即制得鸭病毒性肝炎免疫刺激复合物。本发明复合物免疫活性高，毒副作用小。 【专利类型】发明授权 【申请人】郑州后羿制药有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】451162 河南省郑州市郑州航空港区新港大道东侧 【申请人地区】中国 【申请人城市】郑州市 【申请号】CN201210309927.4 【申请日】2012-08-28 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102836427B 【公开公告日】2014-05-21 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102836427B 【授权公告日】2014-05-21 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】A61K39/29; A61P31/14 【发明人】吴红云; 韩改会; 徐进; 梁军; 张玉利 【主权项内容】1.一种鸭病毒性肝炎免疫刺激复合物，其特征在于：该复合物由鸭病毒性肝炎病毒与皂苷QuilA、脂类混合物在蔗糖垫上制备而成；制备步骤包括：(1)鸭病毒性肝炎病毒尿囊液的制备：将鸭病毒性肝炎病毒接种9日龄的鸡胚尿囊腔中增殖，放在孵化箱中进行孵化至第5～7天，如果出现死亡或者发育不良时，立刻进行尿囊液的收获，置于-80℃冰箱进行保存；如果鸡胚超过第7天没有出现死亡或者发育不良应立刻弃去鸡胚；(2)培养病毒：将步骤(1)中的鸭病毒性肝炎病毒尿囊液接种单层鸭胚成纤维细胞，37℃培养，每隔10～12h观察细胞，如果细胞病变达到80%时，收获细胞，-20℃和室温反复冻融3次，5000r/min离心20～40min，取上清液，弃沉淀，上清液在14000r/min离心1.5～2.5h，获得鸭病毒性肝炎病毒；(3)脂类混合物的制备：将磷脂酰乙醇胺和胆固醇加至浓度为20%的mega-10中，使溶解完全，稀释至8～12mg/mL，分装，2～8℃保存备用；(4)皂苷QuilA溶液的制备：将0.01g皂苷QuilA溶于10mL PBS缓冲液中，终浓度1mg/mL；(5)鸭病毒性肝炎免疫刺激复合物的制备：磷酸盐缓冲液PBS稀释病毒液到蛋白浓度为10mg/mL，加入浓度为20%的mega-10至其终浓度为2%，室温作用2～3h，将病毒液铺到蔗糖垫上，上层为PBS配制的10%蔗糖，其中含有0.4%mega-10，最下面是用PBS配制的30%蔗糖垫，14000r/min离心2～3h，收集样品层和10%的蔗糖层, 加入皂苷QuilA和脂类混合物, 其中皂苷在复合物中的质量含量为0.1～0.2%, 脂类混合物在复合物中的浓度为50～100uL/mL, 将此溶液加入透析袋中进行48～54h的透析，即制得鸭病毒性肝炎免疫刺激复合物。 【当前权利人】河南后羿生物工程股份有限公司 【当前专利权人地址】河南省郑州市新郑港区新港大道东侧 【专利权人类型】有限责任公司 【统一社会信用代码】91410100732445400X 【引证次数】3.0 【他引次数】3.0 【家族引证次数】3.0

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