【摘要】 本发明公开了一种IPTG诱导猪圆环病毒2型(PCV2)重组Cap蛋白表达的方法，具体步骤如下：将pET28a-PCV2-ORF2原核表达载体，转化大肠杆菌DH5a，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的基因的质粒；再将构建的pET28a-ORF2-DH5a质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经过选择性培养、液体培养，加入IPTG，在IPTG终浓度0.1-1.0mmlo/L条件下，10-37℃诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达1-8小时，得到Cap蛋白。其中，最佳诱导条件为IPTG终浓度0.6mmol/L，诱导温度30℃，诱导时间6h。本发明所述的最佳诱导条件能够极大程度提高重组Cap蛋白在大肠杆菌中的表达量，为开发PCV2基因工程苗和相关研究奠定了良好的基础。 【专利类型】发明授权 【申请人】郑州后羿制药有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】451162 河南省郑州市郑州航空港区新港大道东侧 【申请人地区】中国 【申请人城市】郑州市 【申请号】CN201210302993.9 【申请日】2012-08-23 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102978232B 【公开公告日】2014-07-16 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102978232B 【授权公告日】2014-07-16 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12N15/70; C12N15/34; C07K14/01 【发明人】吴红云; 徐进; 王卫芳 【主权项内容】1.一种IPTG诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达的方法，其特征在于，具体步骤如下：1)将pET28a-PCV2-ORF2原核表达载体，转化大肠杆菌DH5a，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的条带的菌液提取质粒；2)将提取的质粒，转化大肠杆菌BL21(DE3)，经过选择性培养、单克隆液体培养、PCR检测，选择带有目的条带的菌液，转接培养；3)在转接培养的菌液中加入IPTG，在IPTG终浓度0.6mmlo/L条件下，30℃诱导猪圆环病毒2型重组Cap蛋白表达6小时；4)取步骤3)不同条件制得的菌液，离心，弃上清液；5)在沉淀中加入loading buffer混匀，沸水浴后迅速冷却；6)离心，得到含有Cap蛋白的上清液。 【当前权利人】河南后羿生物工程股份有限公司 【当前专利权人地址】河南省郑州市新郑港区新港大道东侧 【专利权人类型】有限责任公司 【统一社会信用代码】91410100732445400X 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】7

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