【摘要】 本发明涉及了一种以枯萎病菌毒素和自毒物质对羟基苯甲酸混合液作为选择压力诱导草莓抗连作障碍突变体的筛选方法，属于农业生物技术领域。由尖孢镰刀菌引起的草莓枯萎病和根系自毒物质对羟基苯甲酸是引起草莓严重连作障碍的重要因素。本发明以草莓组培苗叶段为诱导材料，在含有毒素和对羟基苯甲酸混合液半致死浓度(10%毒素＋1.0×10-4molL-1)的最优愈伤组织诱导培养基(MS固体培养基＋麦芽糖(10~30g/L)+TDZ(1~4mg/L)+AgNO31mg/L)中，筛选到分化率高、遗传稳定性强且能结实的三株抗性突变体。本发明为实现草莓连作条件下抗重茬种质资源的突破和创新提供了新的技术手段和理论支持。 【专利类型】发明授权 【申请人】河北农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】071001 河北省保定市灵雨寺街289号河北农业大学科技管理处 【申请人地区】中国 【申请人城市】保定市 【申请人区县】莲池区 【申请号】CN201210021686.3 【申请日】2012-01-31 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103053415B 【公开公告日】2014-01-15 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103053415B 【授权公告日】2014-01-15 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】A01H4/00 【发明人】甄文超; 刘雪静; 齐永志; 马燕会; 代丽 【主权项内容】一种利用草莓枯萎病菌尖孢镰刀菌毒素和自毒物质对羟基苯甲酸混合液作为选择压力诱导筛选抗枯萎病突变体的方法，其特征在于：(1)剪取组培苗叶段，将其接种于MS诱导培养基上诱导愈伤组织，MS诱导培养基的组成为MS固体培养基＋麦芽糖10～30g/L+TDZ1～4mg/L+AgNO31mg/L；(2)将草莓叶段接种于含有不同浓度的由尖孢镰刀菌毒素和自毒物质对羟基苯甲酸组成的混合液的MS诱导培养基中，筛选混合液诱导半致死剂量，确定所述混合液的半致死剂量为10%毒素＋1.0×10-4mol/L对羟基苯甲酸；(3)将草莓叶段接种在含有半致死剂量混合液的MS诱导培养基上，诱导产生不定芽；将不定芽接种在含半致死剂量混合液的MS诱导培养基上，继代培养5代后；再接种于含浓度高一梯度的混合液的MS诱导培养基上继续继代培养5代，筛选再生植株，其中，浓度高一梯度的混合液为：15%毒素＋1.5×10-4mol/L对羟基苯甲酸；(4)将再生植株接种在含有半致死剂量混合液的MS诱导培养基上，测定其分化和遗传稳定性；然后将分化和遗传稳定性高于其亲本野生型的再生植株接种于生根培养基中，光照培养60d后移植到花盆中；再用1.0×10-4mol/L对羟基苯甲酸和1.0×105个/mL尖孢镰刀菌孢子悬浮液处理，40d后鉴定突变体发病情况、生长发育指标和结实性，得到抗性突变体。 【当前权利人】河北农业大学 【当前专利权人地址】河北省保定市灵雨寺街289号河北农业大学科技管理处 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12130000401707023F 【家族被引证次数】4

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