【摘要】 本发明涉及使用吡嘧磺隆分子印迹聚合物分析磺酰脲类除草剂的方法。该方法包括MISPE柱准备、除草剂标准物质贮备液制备、除草剂HPLC标准曲线的绘制、净化样品溶液制备与待分析样品HPLC分析等步骤。该方法使用的吡嘧磺隆固相萃取柱能特异性地吸附吡嘧磺隆等多种结构类似物，具有非常明显的选择性，流速快50%，因此分析时间减少50%，模板化合物残留量几乎为0，避免了残留模板化合物导致的假阳性。该固相萃取柱净化效果显著，简化对样品富集和净化，提高预处理效率，并可重复使用。还可以建立分子印迹固相萃取柱与HPLC仪器联用检测方法，最终能建立各种农产品、水和土壤等生物样品的标准检测方法。 【专利类型】发明授权 【申请人】江西农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】330013 江西省南昌市昌北经济开发区志敏大道1101号江西农业大学食品学院 【申请人地区】中国 【申请人城市】南昌市 【申请人区县】青山湖区 【申请号】CN201210401808.1 【申请日】2012-10-19 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102866226B 【公开公告日】2014-09-24 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102866226B 【授权公告日】2014-09-24 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N30/88 【发明人】汤凯洁; 罗秋水; 吴国平; 熊建华; 余瑞龙 【主权项内容】一种使用吡嘧磺隆分子印迹聚合物分析磺酰脲类除草剂的方法，其特征在于该方法包括下述步骤：A、MISPE柱的制备称取150～250mg吡嘧磺隆分子印迹聚合物，装填到4～8ml固相萃取空柱中，得到吡嘧磺隆分子印迹固相萃取柱MISPE；所述的MISPE柱在使用前用2～10ml二氯甲烷、乙腈或它们的混合物进行活化处理；所述吡嘧磺隆分子印迹聚合物是采用下述合成方法得到的：(i)聚合反应步骤在聚合反应瓶中，按照α-甲基丙烯酸功能单体与吡嘧磺隆的摩尔比4 : 1～8：1，将α-甲基丙烯酸功能单体和模板分子吡嘧磺隆溶于二氯甲烷溶剂中，超声混合4～6min，于是得到一种二氯甲烷预聚合体系；然后，按照α-甲基丙烯酸功能单体、交联剂与引发剂的摩尔比4 : 4 : 1，往所述的二氯甲烷预聚合体系中加入三羟甲基丙烷三甲基丙烯酸酯交联剂与偶氮二异丁腈引发剂，接着再进行超声混合脱气4～6min，最后充氮气除氧气4～6min，再在温度50～70℃的水浴中加热反应20～30h，得到一种高分子聚合物；(ii)模板分子洗脱步骤用力摇动步骤(i)使用的聚合反应瓶，得到具有一定粒径的高分子聚合物，然后在烘箱中温度为65～75℃的条件下进行干燥，再把聚合物装入索氏提取装置中加入洗脱剂洗脱所述模板分子，洗脱10～14h，所述的洗脱剂是甲醇、乙腈与乙酸按照其体积比1.5～2.5 : 0.8～1.2 : 0.8～1.2混合的混合溶剂；在洗脱模板分子的过程中每隔3～5h更换一次洗脱剂，洗脱温度控制在80-100℃；然后，把洗脱的高分子聚合物进行干燥，再加入甲醇边搅拌边加热至温度65～75℃，直到无乙酸味放出，接着再加入丙酮洗去细小颗粒聚合物，最后移入烘箱中进行干燥，得到颗粒度D50为9.15μm的吡嘧磺隆分子印迹聚合物；B、磺酰脲类除草剂标准物质贮备液的制备分别称量5mg吡嘧磺隆、苄嘧磺隆、甲磺隆、烟嘧磺隆和苯磺隆标准物质放于50mL容量瓶中，用乙腈充分溶解后并定容，于是配制得到100μg/mL标准物质贮备液；C、磺酰脲类除草剂HPLC标准曲线的绘制分别移取一定量的在步骤B制备的标准物质贮备液于10mL容量瓶中，用乙腈稀释并定容，得到其浓度分别为1.00、5.00、10.00、15.00、20.00μg/mL标准物质的工作溶液，然后在下述条件下进行HPLC分析：色谱柱C18柱，250mm×4.6mm，填料直径5μm，使用流动相A与流动相B进行梯度洗脱，流动相A为含有0.01重量％磷酸的乙腈-水混合物，乙腈与水的体积比为20：80，流动相B为0.01重量％磷酸的乙腈-水混合物，乙腈与水的体积比为80：20；流速0.8mL/min；柱温30℃；检测波长241nm，进样量10μL；流动相在使用前用有机相0.45μm滤膜抽滤装置进行抽滤和超声波超声脱气20min；每个标准物质浓度重复进样3次，以液相色谱峰面积积分对其相应标准物质浓度作图，得到所述标准物质的HPLC标准曲线，由其相应标准曲线线性部分得到其相应的线性方程；D、净化样品溶液制备把待分析样品经预处理后溶于正己烷溶剂中得到一种样品溶液，把该样品溶液加到在步骤A准备的MISPE柱上，先进行淋洗，然后进行洗脱，收集洗脱液，合并洗脱液在N2气下进行浓缩，除去有机溶剂，其残留物用0.5～1.5mL乙腈溶解，得到一种净化样品溶液；E、待分析样品的HPLC分析步骤D中得到的净化样品溶液在步骤C描述的条件下进行HPLC分析，根据步骤C得到的其线性方程，由其液相色谱峰面积积分代入相应的公式得到待分析样品的磺酰脲类除草剂含量。 【当前权利人】江西农业大学 【当前专利权人地址】江西省南昌市昌北经济开发区志敏大道1101号江西农业大学食品学院 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12360000491015759G 【被引证次数】1 【被他引次数】1.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】5

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