【摘要】 本发明公开了一种凹凸棒土负载壳聚糖包被橙色粘球菌的固定化方法，以凹凸棒土为原料，对凹凸棒土进行改性处理后负载壳聚糖，再采用包埋、吸附法相结合对橙色粘球菌进行固定化。本发明利用凹凸棒土负载壳聚糖固定橙色粘球菌，降低橙色粘球菌活菌制剂生产成本，提高活菌存活率，操作方便，可适用于粗放的工业化大生产。 【专利类型】发明授权 【申请人】淮阴工学院 【申请人类型】学校 【申请人地址】223005 江苏省淮安市经济开发区高教园区枚乘东路1号 【申请人地区】中国 【申请人城市】淮安市 【申请人区县】清江浦区 【申请号】CN201210561348.9 【申请日】2012-12-21 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103045581B 【公开公告日】2014-03-12 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103045581B 【授权公告日】2014-03-12 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12N11/14; C12N11/10 【发明人】贾建波 【主权项内容】1.凹凸棒土负载壳聚糖包被橙色粘球菌的固定化方法，以凹凸棒土为原料，对凹凸棒土进行改性处理后负载壳聚糖，再采用包埋、吸附法相结合对橙色粘球菌进行固定化；其特征是：凹凸棒土负载壳聚糖包被橙色粘球菌固定化方法包括以下步骤： (1)凹土纯化：凹土与去离子水混合，凹土与去离子水的比例为1 : 5(w/v)，常温下100r/min搅拌24h，静置沉降24h后倒掉最下层杂质和上清液，加入与上清液等量的去离子水，再常温100r/min搅拌24h，静置24h倒掉上清液和下层杂质，抽滤，105℃烘干，得纯化凹土； (2)凹土改性：取纯化凹土，加入体积浓度为60%的硫酸溶液，凹土与60%的硫酸溶液的比例为1 : 5(w/v)，常温下以100r/min的转速搅拌24h，抽滤，水洗滤饼至水为中性，滤饼105℃烘干，得改性凹土； (3)凹凸棒土负载壳聚糖：用3%(v/v)的醋酸水溶液缓慢溶解脱乙酰度为90%的壳聚糖，配置浓度为5%(w/v)的壳聚糖溶液；取改性凹土加入浓度为5%(w/v)的壳聚糖溶液中，改性凹土与壳聚糖的质量比为1 : 0.3，50℃搅拌6 h，静置6 h后除去上清液，抽滤，滤饼115℃干燥，冷却，研细，过160目筛，得凹凸棒土负载壳聚糖的固体吸附剂； (4)菌株活化：取一株橙色粘球菌(Myxococcus fulvus) JCH-04，保藏号为CGMCC No. 2893，菌株在CY培养基上34℃培养1天，在发酵培养基中34℃、150rpm摇瓶培养2天，接种量为106CFU/ml；该菌株16S rDNA的GenBank登录号为FJ826620；所述的CY培养基组成为：每1000ml水中含有酪素水解蛋白胨3g，酵母膏1g，牛血白蛋白0.5g，泛酸钙0.5g，pH7.5； 所述的发酵培养基组成为：每1000mL水中含有可溶性淀粉8g ，黄豆粉12g，蔗糖10g，葡萄糖2.5g，酵母膏0.25g , CaCl2 1g， MgSO4·7H2O 0.5g， pH 7.5； (5)菌株扩培：将菌株活化的液体菌种接种于装有发酵培养基的三角瓶中，34℃、150rpm摇瓶培养3天，接种量为106CFU/ml，采用流加量为50mL的变速流加补料，单位菌浓度达到4.70×109 CFU/ml，在无菌条件下将菌株扩培的培养菌液用0.2μm微滤膜过滤浓缩成500亿CFU/ml浓缩菌液； (6)凹凸棒土负载壳聚糖固定化橙色粘球菌：凹凸棒土负载壳聚糖的固体吸附剂加入步骤(5)的浓缩菌液中，使负载壳聚糖凹凸棒土与菌液的比例为1 : 12-1 : 8(w/v)，在温度40℃、150 r/min振荡60min，抽滤，滤饼-50℃预冻3h，再迅速移入冷冻干燥机冷冻干燥 18-20h，冻干后水分控制在4-5%，得凹凸棒土负载壳聚糖固定化橙色粘球菌的活菌制剂。。 【当前权利人】淮阴工学院 【当前专利权人地址】江苏省淮安市经济开发区高教园区枚乘东路1号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12320000466009787T 【引证次数】3.0 【自引次数】1.0 【他引次数】2.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】13

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