【摘要】 本发明属于转基因领域，涉及一种用于制备转基因小鼠的精子处理方法。一种用于制备转基因小鼠的精子处理方法，将小鼠附睾精子于5％CO2培养箱37℃孵育8～10分钟，然后将含有目的基因的线性DNA片段与精子混合，2℃～5℃冰浴25～30分钟，40～45℃热休克1～3分钟，2℃～5℃冰浴3～5分钟，5％CO2培养箱37℃孵育50～70分钟获能。该方法能够提高精子膜的通透性，便于基因片段进入精子内部，提高转基因效率。解决了以精子为载体制备转基因小鼠效率低、稳定性差、传代困难的问题。将为转基因小鼠制备提供一种有效的方法。 【专利类型】发明授权 【申请人】朱孝荣; 徐州医学院 【申请人类型】个人,学校 【申请人地址】221002 江苏省徐州市淮海西路84号徐州医学院实验动物中心 【申请人地区】中国 【申请人城市】徐州市 【申请人区县】泉山区 【申请号】CN201210026458.5 【申请日】2012-02-07 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103243076B 【公开公告日】2014-04-09 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103243076B 【授权公告日】2014-04-09 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12N5/10; C12N15/63; C12N15/66 【发明人】朱孝荣; 袁红华; 彭长凌 【主权项内容】1.一种用于制备转基因小鼠的精子处理方法，其特征在于将小鼠附睾精子于5%CO2培养箱37℃孵育8~10分钟，然后将含有目的基因的线性DNA片段与精子混合，2℃~5℃冰浴25~30分钟，40~45℃热休克1~3分钟，2℃~5℃冰浴3~5分钟，5%CO2培养箱37℃孵育50~70分钟获能；所述的含有目的基因的线性DNA片段是将目的基因插入质粒pcDAN3.1(+)后得到重组表达载体pTH-CB，重组表达载体pTH-CB经Pvul、Smal 双酶切得到的包括特异性启动子、目的基因在内的线性DNA片段；所述的重组表达载体pTH-CB是通过如下方法获得：克隆小鼠酪氨酸羟化酶启动子序列和钙结合蛋白D-28K基因cDNA序列，用BamH I、HindIII内切酶双酶切小鼠酪氨酸羟化酶启动子序列和质粒pcDAN3.1(+)，回收连接酶切序列，使得小鼠酪氨酸羟化酶启动子序列替换pcDAN3.1(+)中的CMV启动子序列；在此基础上，用HindIII、NotI内切酶双酶切上述重组质粒和钙结合蛋白D-28K基因cDNA序列，将钙结合蛋白D-28K基因cDNA序列插入上述重组质粒的多克隆位点即得所述的重组表达载体pTH-CB。 【当前权利人】朱孝荣; 徐州医学院 【当前专利权人地址】江苏省徐州市淮海西路84号徐州医学院实验动物中心; 江苏省徐州市铜山路209号徐州医学院药学院 【家族引证次数】1.0

未经允许不得转载：http://www.zhongzhencnc.com/1790024263.html