【摘要】 本发明公开了一种制备致病性维氏气单胞菌卵黄抗体的方法，包括制备菌苗、免疫程序、卵黄液的预处理、卵黄粉的制备等步骤。本发明易操作，效果好，对免疫后每间隔7d收集的鸡蛋进行效价测定，第四次免疫后ELISA测定的效价可达1：12560，进一步制成的卵黄抗体粉效价不变。 【专利类型】发明授权 【申请人】南通大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】226019 江苏省南通市啬园路9号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南通市 【申请人区县】崇川区 【申请号】CN201310233318.X 【申请日】2012-06-04 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103304664B 【公开公告日】2014-10-29 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103304664B 【授权公告日】2014-10-29 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C07K16/12; C07K16/02 【发明人】曹军; 王勇军; 常燕; 金大勇; 王兆慧; 刘思园; 徐磊 【主权项内容】1.一种制备致病性维氏气单胞菌卵黄抗体的方法，其特征是：包括下列步骤： (1)将保藏编号为CCTCC No：M2012154的暗纹东方鲀源致病性维氏气单胞菌(Aeromonas veronii)SY-R2划线接种大豆酪蛋白琼脂培养基平板，37℃培养24h，挑取单菌落涂布于直径15cm的TSA平板，于37℃培养20h；用无菌PBS洗下菌苔，测定并调整菌液浓度为2.5×1010CFU/mL；纯检合格后按0.5%福尔马林液37℃灭活24h，无菌检验合格后供制备抗原；每5重量份灭活菌液加入灭菌的氢氧化铝胶1重量份，加入相当于灭活菌液和氢氧化铝胶总重量0.01%的硫柳汞防腐，得到菌苗； (2)免疫程序：28周龄罗曼蛋鸡进行翅静脉采血作为对照血清，开产后收集鸡蛋作为实验对照；开产后第3天，用步骤(1)制备的菌苗胸肌多点注射免疫，剂量0.5mL/只；首次免疫后1周进行第二次免疫，免疫剂量1.0mL/只；第二次免疫后每隔20d加强免疫，连续免疫2次，免疫剂量均为1.0mL/只；第四次免疫后40d，再进行免疫，免疫剂量为2.0mL/只；从首次免疫开始，每次免疫后7天翅静脉采血分离血清，并收集所有鸡蛋，对免疫后每间隔7d收集的鸡蛋进行效价测定；用微量凝集法初步测定免疫鸡血清和卵黄中抗体的有无； (3)卵黄液的预处理：收集第四次免疫后鸡蛋，用清水刷拭干净后浸于0.5%新洁尔灭中消毒、凉干，于无菌条件下分离出卵黄，加入1.5倍体积的生理盐水，高速匀浆制备乳浊液； (4)卵黄粉的制备：将经步骤(3)预处理的卵黄液进行喷雾干燥，制得卵黄粉，其中IgY即抗暗纹东方鲀源致病性维氏气单胞菌卵黄抗体； 步骤(2)对免疫后每间隔7d收集的鸡蛋，无菌条件下分离出卵黄，80g/L聚乙二醇-8000一步法提纯卵黄抗体，ELISA测定抗体效价，第四次免疫后ELISA测定的卵黄抗体效价为1：12560； 步骤(4)中喷雾干燥的进风温度为120℃-140℃，出风温度为68℃-72℃。 【当前权利人】南通药享科技有限公司 【当前专利权人地址】江苏省南通市高新区世纪大道266号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12320000466012919A 【引证次数】5.0 【自引次数】2.0 【他引次数】3.0 【家族引证次数】5.0

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