【摘要】本发明公开了一种可用于抗震避险中小学生课桌椅。发明目的是提供一种能够有效承载、承受冲击、并能有效分散压力，而且操作简捷、方便，结构简单成本低，易于普及推广使用的抗震避险课桌，主要是针对中小学教室使用，也可用于大型公共场所，一旦发生各
【摘要】 本发明公开了一种从小RNA合成的cDNA文库分离出microRNA前体cDNA的方法，包括以下步骤：将cDNA进行PCR扩增；得到的cDNA片段用5’端带有生物素标记的引物进行PCR扩增，扩增后得到的cDNA双链进行变性处理，然后用磁珠技术进行cDNA双链分离；对分离得到的cDNA单链进行复性，形成具有具有不同二级结构的单链cDNA，分别回收，进行PCR反应形成双链；将PCR片段经限制酶酶切，克隆测序。本发明采用的测序方法能够更为有效地提高miRNA克隆测序的效率。。数据由整理 【专利类型】发明授权 【申请人】南京农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】210095 江苏省南京市卫岗1号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】玄武区 【申请号】CN201010235667.1 【申请日】2010-07-23 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101914524B 【公开公告日】2011-12-21 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN101914524B 【授权公告日】2011-12-21 【授权公告年份】2011.0 【IPC分类号】C12N15/10 【发明人】周波; 刘红林 【主权项内容】1.一种从小RNA合成的cDNA文库分离出microRNA前体cDNA的方法，包括以下步骤：将合成的cDNA进行PCR扩增，扩增后将PCR片段经限制酶酶切，克隆测序，其特征在于：该方法在进行PCR扩增之后、PCR片段酶切之前还需要对所获得的PCR产物进行具有microRNA前体片段的不同二级结构单链分离；所述分离过程包括以下步骤： (1)将得到的cDNA片段用5’端带有生物素标记的引物进行PCR扩增，扩增后得到的cDNA双链进行变性处理，然后用磁珠技术进行cDNA双链分离； (2)对步骤(1)中得到的cDNA单链进行复性，得到具有microRNA前体片段的二级结构的cDNA； (3)通过电泳分离步骤(2)中得到的cDNA，得到具有不同二级结构的单链cDNA，分别回收，进行PCR反应形成双链； 其中步骤(1)中PCR扩增引物为：F：5’-AAAGATCCTGCAGGTGCGTCA-3’，R：5’-GTCTCTAGCCGCAGGATCGATG-3’； 步骤(1)中的cDNA双链变性处理条件为95℃时5min； 步骤(2)中单链复性为在以下条件下依次进行：94℃时2min，60℃时30sec，72℃时1min，4℃时5min； 步骤(3)中电泳分离采用聚丙烯酰胺电泳或二维电泳，电泳结束后银染。 【当前权利人】南京农业大学 【当前专利权人地址】江苏省南京市卫岗1号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000466007562R 【引证次数】2.0 【他引次数】2.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】8
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