【摘要】 本发明公开了一种黄菖蒲愈伤组织的培养方法：当黄菖蒲种子胚芽上的愈伤组织直径超过0.5cm时，将其从种子胚芽上切除，接种到新鲜的固体继代培养基上，进行继代培养，此后每2周继代培养一次；取出一粒愈伤组织在无菌滤纸上用镊子夹成小块，放入新鲜的培养液中，在25℃、90转/分钟条件下培养2周，形成愈伤组织悬浮液，将愈伤组织悬浮液按1∶30(v/v)接种到新鲜的培养液中进行继代培养，继代培养周期为2周；当需要使用愈伤组织进行快速繁殖或者转基因时，使用50目孔径的无菌尼龙膜过滤愈伤组织悬浮液，得到的大块愈伤组织转接到固体继代培养基上备用，过滤后剩余的愈伤组织悬浮液继续培养。本发明工艺简单，愈伤组织诱导迅速。 【专利类型】发明授权 【申请人】南京大学; 江苏九久环境科技有限公司 【申请人类型】企业,学校 【申请人地址】210008 江苏省南京市汉口路22号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】玄武区 【申请号】CN201010162983.0 【申请日】2010-05-05 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101816287B 【公开公告日】2011-12-14 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN101816287B 【授权公告日】2011-12-14 【授权公告年份】2011.0 【IPC分类号】A01H4/00 【发明人】杨柳燕; 杜宏伟; 武俊; 肖琳; 李丽观; 陈洪龄; 许超; 华海峰; 张全兴 【主权项内容】1.一种黄菖蒲愈伤组织的培养方法，其特征在于它包括如下步骤：(1)当黄菖蒲种子胚芽上的愈伤组织直径超过0.5cm时，将其从种子胚芽上切除，接种到新鲜的固体继代培养基上，进行继代培养，此后每2周继代培养一次；(2)取出一粒经步骤(1)继代培养的愈伤组织在无菌滤纸上用镊子夹成直径为0.1～0.2cm的小块，放入新鲜的培养液中，在25℃、90转/分钟条件下培养2周，形成愈伤组织悬浮液，将愈伤组织悬浮液按1∶30(v/v)接种到新鲜的培养液中进行继代培养，继代培养周期为2周；(3)当需要使用愈伤组织进行快速繁殖或者转基因时，使用50目孔径的无菌尼龙膜过滤步骤(2)中的愈伤组织悬浮液，得到的大块愈伤组织转接到固体继代培养基上备用，过滤后剩余的愈伤组织悬浮液继续按照步骤(2)的方法培养；步骤(1)和(3)中，所述的固体继代培养基组分如下：MS培养基，另加终浓度为30g/L的蔗糖，500mg/L的水解酪蛋白，2mg/L 2，4-二氯苯氧基乙酸，3g/L琼脂糖；步骤(2)中，所述的培养液组分如下：MS培养基，另加终浓度为30g/L的蔗糖、500mg/L的水解酪蛋白、2mg/L 2，4-二氯苯氧基乙酸。 【当前权利人】南京大学; 江苏九久环境科技有限公司 【当前专利权人地址】江苏省南京市汉口路22号; 江苏省无锡市新区太科园净慧东道77号-8-3-2 【专利权人类型】; 有限责任公司(自然人投资或控股的法人独资) 【统一社会信用代码】12100000466007458M; 91320282672004004B 【家族引证次数】1.0 【家族被引证次数】7

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