【摘要】 本发明的绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建，确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；设计克隆Noggin基因全长cDNA的PCR引物，上游引物N1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物N2：CGACTCGAGCTAGCACGAGCACTTGCACTC；其引物酶切位点外侧含有保护碱基ATA和CGA；将目的基因克隆于pET41a原核表达载体中，获得pET41a-Noggin重组载体；设计将目的基因定向克隆与慢病毒表达载体的引物：上游引物P1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物P2：CGACTCGAGCTAAGCGTAGTCTGGGACGTCGTATGGGTAGCACGAGCACTTGCACTC(包含HA抗体标签)；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒载体中，获得Noggin基因慢病毒载体，生产重组病毒，生产转Noggin基因绵羊；通过PCR方法鉴定其转基因羊。 【专利类型】发明申请 【申请人】新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国 澳大利亚绵羊育种研究中心 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】830000 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区克拉玛依东街151号 【申请人地区】中国 【申请人城市】乌鲁木齐市 【申请人区县】沙依巴克区 【申请号】CN201010580022.1 【申请日】2010-12-09 【申请年份】2010 【公开公告号】CN102181447A 【公开公告日】2011-09-14 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN102181447B 【授权公告日】2013-09-25 【授权公告年份】2013.0 【IPC分类号】C12N15/12; C12N15/10; C12N15/867; A01K67/027 【发明人】刘明军; 贺三刚; 李文蓉; 张雪梅; 张宁 【主权项内容】1.绵羊Noggin基因的克隆和慢病毒表达载体的构建，其特征在于：1)确定绵羊Noggin基因编码区的全序列；2)设计克隆Noggin基因全长cDNA的PCR引物，上游引物N1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物N2：CGACTCGAGCTAGCACGAGCACTTGCACTC；上下游引物酶切位点外侧含有酶切的保护碱基ATA和CGA；3)将目的基因定向克隆于pET41a原核表达载体中，获得pET41a-Noggin重组原核表达载体；4)设计将目的基因定向克隆与慢病毒表达载体的引物：上游引物P1：ATAGGATCCGGAGGCATGGAGCGCTGCCCCAG，下游引物P2：CGACTCGAGCTAAGCGTAGTCTGGGACGTCGTATGGGTAGCACGAGCACTTGCACTC(包含HA抗体标签)；将目的基因定向克隆于pLEX慢病毒表达载体中，获得Noggin基因慢病毒载体，生产重组病毒，利用慢病毒卵生产转Noggin基因绵羊；5)通过PCR方法鉴定转基因羊。 【当前权利人】新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国 澳大利亚绵羊育种研究中心 【当前专利权人地址】新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区克拉玛依东街151号 【引证次数】2.0 【被引证次数】3 【他引次数】2.0 【被自引次数】1.0 【被他引次数】2.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】3

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