热稳定性提高的脂肪酶突变体专利-数控机床品牌厂家

【摘要】热稳定性提高的脂肪酶突变体，属于酶的基因工程技术领域。本发明公开了由华根霉(Rhizopus chinensis)CCTCC No.M201021脂肪酶作为亲本，经分子生物学技术而获得的热稳定性提高的脂肪酶突变体。在各突变体的氨基酸序列中，涉及到的氨基酸突变为Met101Thr、Glu107Gly、Ala129Ser、Ser151Asn、Cys160Leu、Lys161Arg、Pro168Leu、Pro168His、Leu180His、Asp182Tyr、Thr183Ala、Thr218Ser、Lys219Asp、Ala230Phe、Ser234Phe、Val261Gly、His317Pro、Val329Ala、Glu363Arg、Asn366Asp、Ser373Cys中的一种或几种。以在65℃下半衰期t50来表示，这些突变体的热稳定性较亲本华根霉脂肪酶得到了提高。本发明也公开了编码脂肪酶突变体的DNA序列、表达载体、宿主细胞。【专利类型】发明申请【申请人】江南大学【申请人类型】学校【申请人地址】214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号江南大学生物工程学院【申请人地区】中国【申请人城市】无锡市【申请人区县】滨湖区【申请号】CN201010254620.X 【申请日】2010-08-13 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101974499A 【公开公告日】2011-02-16 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN101974499B 【授权公告日】2012-07-11 【授权公告年份】2012.0 【IPC分类号】C12N9/20; C12N15/81; C12N1/19 【发明人】喻晓蔚; 徐岩; 王睿【主权项内容】热稳定性提高的脂肪酶突变体，其特征在于由亲本华根霉(Rhizopuschinensis)CCTCC M 201021脂肪酶进行定向进化，通过易错PCR、DNAShuffling和定点突变，获得脂肪酶突变体，亲本华根霉氨基酸序列SEQ ID NO：1中在氨基酸取代位置发生突变，采用“原始氨基酸‑位置‑替换的氨基酸”来表示脂肪酶突变体中突变的氨基酸，所述脂肪酶突变体为：，脂肪酶突变体氨基酸取代位置突变体1 Ser234Phe突变体2 Pro168Leu/Val329Ala突变体3 Cys160Leu突变体4 His317Pro/Met101Thr突变体5 Ser151Asn/Leu180His突变体6 Val261Gly/Ser373Cys突变体7 Asp182Tyr/Ala230Phe突变体8 Leu180His/Thr218Ser突变体9 Asn366Asp/Leu180His/Val329Ala突变体10 Ser234Phe/Leu180His/Thr218Ser突变体11 Ser234Phe/Pro168His/Val329Ala/Cys160Leu/His317Pro/Met101Thr突变体12 Leu180His/Thr218Ser/Val261Gly/Lys161Arg突变体13 Glu107Gly/Ala129Ser/Glu363Arg/Lys161Arg/Val261Gly/Leu180His突变体14 Lys161Arg/Leu180His/Thr218Ser/Met101Thr/Thr183Ala/ Glu107Gly/Ser151Asn/Glu363Arg突变体15 Glu107Gly/Ala129Ser/Ser151Asn/Lys161Arg/Leu180His/ Ser234Phe/Glu363Arg/Val329Ala突变体12‑1 Ala230Phe/Leu180His/Thr218Ser/Val261Gly/Lys161Arg突变体13‑1 Glu107Gly/Ala129Ser/Ser151Asn/Lys219Asp/Leu180His/ Glu363Arg/Ala230Phe华根霉脂肪酶氨基酸突变体的氨基酸序列为SEQ ID NO：2，有22个突变氨基酸；用于表达所述的脂肪酶突变体的表达载体为：pPIC9K，pPIC3.5K，pPICZα，pPICZ；用于所述的表达载体转化的微生物宿主细胞为毕赤酵母。【当前权利人】金湖县农副产品营销协会【当前专利权人地址】江苏省淮安市金湖县衡阳南路33号【专利权人类型】公立【统一社会信用代码】1210000071780177X1 【引证次数】2.0 【被引证次数】23 【自引次数】1.0 【他引次数】1.0 【被自引次数】5.0 【被他引次数】18.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】23

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