【摘要】 本发明涉及一种简单快速同步检测三种水稻病毒的方法，应用一套病毒特异性引物以待测样品总RNA为模板进行一步RT-PCR扩增，该引物共有6条，分别为DRS-1、DRS-2、DRB-1、DRB-2、DSR-1以及DSR-2，它们的基因序列如序列表所示，最后通过凝胶电泳条带以判断水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)、水稻条纹病毒(RSV)以及南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)的侵染状况。发明有益的效果是：本发明针对生产实际，发展建立了一种快速、准确、灵敏且同步检测这3种重要水稻病毒的方法，并成功应用于单头飞虱以及田间样品的检测和诊断，为水稻黑条矮缩病、条纹病、南方黑条矮缩病的准确诊断、预测预报和科学防控提供了技术支撑。 -官网 【专利类型】发明授权 【申请人】浙江省农业科学院 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】310021 浙江省杭州市石桥路198号 【申请人地区】中国 【申请人城市】杭州市 【申请人区县】上城区 【申请号】CN201210049824.9 【申请日】2012-02-29 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102559937B 【公开公告日】2014-04-16 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102559937B 【授权公告日】2014-04-16 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12Q1/70; C12Q1/68; C12R1/94 【发明人】张恒木; 吴为奇; 郭西贵; 羊健; 吕明芳; 陈剑平 【主权项内容】1.一种同步检测三种水稻病毒的方法，其特征是：该检测方法应用一套病毒特异性引物以待测样品总RNA为模板进行一步RT-PCR扩增，该引物共有6条，分别为DRS-1、DRS-2、DRB-1、DRB-2、DSR-1以及DSR-2，它们的基因序列如序列表所示，最后通过凝胶电泳条带判断水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)、水稻条纹病毒(RSV)以及南方水稻黑条矮缩病毒(SRBSDV)的侵染状况，具体包括以下步骤：1)引物设计：通过比对分析RBSDV、RSV以及SRBSDV外壳蛋白的基因，获得3种病毒种内保守种间呈多态性的区域，设计针对3种水稻病毒的6条特异性引物；2)样品总RNA提取：将待测样品置于1.5mL离心管中，加入TRIzol试剂，提取总RNA保存于-80℃冰箱中备用；3)扩增反应：采用One Step RT-PCR Kit以样品总RNA提取物为模板进行扩增，反应总体积50μL，内含样品总RNA抽提物5μL，其他各组分参照试剂盒说明，包括2×反应缓冲液25μL，6条引物各1μL，酶混合物2μL，再添加无RNase的ddH2O至总体积50μL，反应程序为50℃反转录30min；94℃预变性2min；94℃变性30s，63℃退火30s，72℃延伸30～60s，30个循环；72℃延伸10min；4)电泳分析：取扩增产物5μL，点样至1.2％的琼脂糖凝胶上样孔中，以DL2000DNA标准分子量作为参照，在120伏的电压下于1×TAE电泳缓冲液中电泳30～60min，EB染色后在紫外灯下观察，记录并分析与预期片断大小的一致性。 ： 【当前权利人】浙江省农业科学院 【当前专利权人地址】浙江省杭州市石桥路198号 【统一社会信用代码】12330000470001585G 【家族被引证次数】6

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