【摘要】 本发明涉及观察植物根内部显微结构的方法，可有效解决用光学显微镜清晰观察植物根的内部结构问题，方法是，首先，将挖出植物的根，清洗后剪成小段，再将根用甲醇固定，然后，用琼脂糖溶液包埋，冷却凝固后修成小块，徒手切片后，置于容器内的蒸馏水中，再进行乳酸透明，盖好，用小檗碱或荧光黄染色后用水漂洗，再用甲苯胺蓝O或番红O进行后染色，再用水漂洗，水封片后，用倒置荧光显微镜观察并摄像，可以得到清晰的图像，实现观察植物根内部显微结构，有效用于药物植物的分类、发育学、生态学、生理学的研究，本发明方法简单，操作容易，成本低，工作量小，成功率高，效果好，可以用于对根形态解剖的研究，对于植物较细的根切片更为简单有效。 【专利类型】发明授权 【申请人】河南中医学院 【申请人类型】学校 【申请人地址】450016 河南省郑州市郑东新区龙子湖高校院区 【申请人地区】中国 【申请人城市】郑州市 【申请号】CN201210275738.X 【申请日】2012-08-06 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102768209B 【公开公告日】2014-06-11 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102768209B 【授权公告日】2014-06-11 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N21/84; G01N1/30 【发明人】刘孟奇; 王小巧; 冯卫生; 陈随清; 董诚明 【主权项内容】1.一种观察植物根内部显微结构的方法，其特征在于，由以下步骤实现：(1)、根的处理，从土壤中挖取植物的根，用清水洗净，再用剪刀修成5-10mm的小段根；所述植物的根为药用植物的根；(2)、对小段根用甲醇固定，方法是，将小段根浸入甲醇中固定1-6h，杀死细胞，保持细胞的性状，使组织不易变形，放在冰箱中4℃下保存，备用；(3)、琼脂糖溶液包埋，对步骤(2)处理后的小段根放入铝箔模子中，每个铝箔模子中平行放置2-4个小段根，铝箔模子的规格为高10-15mm，长和宽10-20mm，每个铝箔模子中加入40-55℃ 的浓度为4-9%的琼脂糖溶液，琼脂糖溶液高度小于铝箔模子的高度，为8-12 mm，冷却至室温后凝固成琼脂糖凝胶块；所述的浓度为4-9%的琼脂糖溶液，是由4-9g的琼脂糖加水至100mL制成；(4)、将琼脂糖凝胶块修成小块，方法是，从铝箔模子中取出步骤(3)中凝固成的琼脂糖凝胶块，用刀片切割、修整成厚度6-10 mm，长和宽各6-10 mm的凝胶小块，每个凝胶小块中有一小段根，凝胶小块的上、下两面与根长轴垂直；(5)、徒手切片，用刀片将凝胶小块横切成厚度0.2-0.5mm的切片，将切片置入装有蒸馏水的培养皿中，备用；(6)、乳酸透明，方法是，在容器中加0.5-1.5mL的透明剂，将步骤(5)中制成的切片从培养皿的蒸馏水中转入装有透明剂的容器中，用玻璃片盖好，在65-75℃的水内水浴0.5-1.5 h；所述的透明剂是由乳酸和浓度为50%的水合氯醛制成的溶液，乳酸和浓度50%水合氯醛的体积比为1：1，浓度50%的水合氯醛是由水合氯醛50g加水至100mL制成；(7)、染色，方法是，将步骤(6)乳酸透明后的切片从乳酸溶液中取出放入另备的容器中，加入0.5-1.5mL浓度为0.05-0.2%的小檗碱，或者加0.5-1.5mL浓度为0.01%的荧光黄088，在 65-75℃的水内水浴染色0.5-1.5 h；所述的浓度为0.05-0.2%的小檗碱，是由0.05-0.2g小檗碱加乳酸至100mL制成；所述的浓度为0.01%的荧光黄088，是由0.01g荧光黄088加乳酸至100mL制成；(8)、后染色，方法是，取出步骤(7)染色后的切片，用水漂洗脱色后，再用浓度0.05-0.2%的甲苯胺蓝O溶液或浓度0.1-0.5%番红O溶液染色1-3min，用水漂洗干净后，用水封片；所述的浓度0.05-0.2%的甲苯胺蓝O溶液，是由0.05-0.2g甲苯胺蓝O加水至100mL制成；所述的浓度0.1-0.5%番红O溶液，是由0.1-0.5g番红O加水至100mL制成；(9)、显微镜观察，用倒置荧光显微镜观察照相，将同一切片同一视野下分别用亮光和紫外光分别照相，利用操作及分析软件的图像叠加功能，将图像叠加后可以得到清晰完整的图像。。 【当前权利人】河南中医学院 【当前专利权人地址】河南省郑州市郑东新区龙子湖高校院区 【统一社会信用代码】12410000415800712R 【引证次数】2.0 【他引次数】2.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】19

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