【摘要】 一种(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其以(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯为底物，该底物在生物催化剂的作用下，与氰化钠反应生成目标产物(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯，所述的生物催化剂为重组卤代醇脱卤酶，所述的反应在pH为6-8的水相中进行。本发明通过采用重组卤代醇脱卤酶，使得底物浓度提高，酶用量降低，从而降低了生产成本，并且本发明通过对工艺的优化，使得产品的纯度和收率都有所提高。 【专利类型】发明授权 【申请人】苏州汉酶生物技术有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】215600 江苏省苏州市张家港市国泰北路1号F栋2楼 【申请人地区】中国 【申请人城市】苏州市 【申请人区县】张家港市 【申请号】CN201210556375.7 【申请日】2012-12-20 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103014082B 【公开公告日】2014-08-27 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103014082B 【授权公告日】2014-08-27 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12P13/00 【发明人】鞠鑫; 尹将来; 张超 【主权项内容】1. 一种(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯的生物制备方法，其以(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯为底物，该底物在生物催化剂的作用下，与氰化钠反应生成目标产物(R)-4-氰基-3-羟基丁酸乙酯，其特征在于：所述的生物催化剂为重组卤代醇脱卤酶，所述的重组卤代醇脱卤酶的制备方法为：将卤代醇脱卤酶单菌落接种到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中，于30-40℃下摇床活化8-12小时，将活化后得到的培养物转接到含氨苄青霉素抗性的液体LB培养基中，于30-40℃下扩大培养至OD600值达到0.6-0.8，加入诱导剂，于25-35℃继续培养8-12小时，离心收集沉淀物，加入磷酸盐缓冲液得悬浮液，将悬浮液置于冰浴中超声波破碎8-12分钟，再离心，分离上清液，将上清液预冻至温度为-10~-25℃，然后再冻干24-48小时，即得重组卤代醇脱卤酶，所述的反应在pH为6-8的水相中进行；在起始时的反应体系中，所述的底物(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的浓度为150-200 mg/ml，所述的重组卤代醇脱卤酶为底物(S)-4-氯-3-羟基丁酸乙酯的0.4-1%(w/w)。 【当前权利人】苏州汉酶生物技术有限公司 【当前专利权人地址】江苏省苏州市张家港市国泰北路1号F栋2楼 【专利权人类型】有限责任公司 【统一社会信用代码】91320582569121739F 【引证次数】3.0 【被引证次数】1 【他引次数】3.0 【被他引次数】1.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】5

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