【摘要】 本发明涉及一种游离甲状腺素的纳米磁微粒化学发光测定试剂盒及其制备方法和检测方法，试剂盒包括含有荧光素标记的游离甲状腺抗体的溶液、包被有抗荧光素抗体的磁微粒的悬浮液，以及含有碱性磷酸酶标记的游离甲状腺素抗原的溶液，该碱性磷酸酶标记的游离甲状腺素抗原由碱性磷酸酶与游离甲状腺素抗原通过交联剂辛二酸二琥珀酰亚胺酯连接构成。本发明使得能够以更低成本和更高准确度和精密度对游离甲状腺素进行定量检测。 【专利类型】发明授权 【申请人】苏州浩欧博生物医药有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】215123 江苏省苏州市工业园区星湖街218号C6栋 【申请人地区】中国 【申请人城市】苏州市 【申请人区县】吴中区 【申请号】CN201210571304.4 【申请日】2012-12-25 【申请年份】2012 【公开公告号】CN103063852B 【公开公告日】2014-11-26 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN103063852B 【授权公告日】2014-11-26 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N33/78; G01N21/76 【发明人】于大为; 程晓蕾; 李冬冬 【主权项内容】1.一种游离甲状腺素的化学发光免疫分析试剂盒，所述试剂盒包括用于免疫反应步骤的免疫反应试剂，所述的免疫反应试剂包括含有荧光素标记的游离甲状腺抗体的溶液和包被有抗荧光素抗体的磁微粒的悬浮液，其特征在于：所述的免疫反应试剂还包括含有碱性磷酸酶标记的游离甲状腺素抗原的溶液，该碱性磷酸酶标记的游离甲状腺素抗原由碱性磷酸酶与游离甲状腺素抗原通过交联剂辛二酸二琥珀酰亚胺酯连接构成；所述的含有荧光素标记的游离甲状腺抗体的溶液的pH为7～9，其中的荧光素标记的游离甲状腺抗体的浓度为0.5～1μg/mL，该含有荧光素标记的游离甲状腺抗体的溶液的制备方法如下：配制含有荧光素的pH为9～10的缓冲液，然后按照荧光素与抗游离甲状腺素抗体的分子比为20～200 : 1的比例，将所述含有荧光素的pH为9～10的缓冲液与抗游离甲状腺素抗体的pH为9～10的缓冲液混合，混匀后，室温静置反应，然后将反应液通过G-25凝胶柱进行分离，除去游离的荧光素，得到含有荧光素标记的抗游离甲状腺素抗体的溶液，接着用具有适当pH值的缓冲液调整浓度和pH，即得；所述的含有碱性磷酸酶标记的游离甲状腺素抗原的溶液的pH为7～9，其中碱性磷酸酶标记的游离甲状腺素抗原的浓度为0.02～0.1μg/mL，所述含有碱性磷酸酶标记的游离甲状腺素抗原的溶液的制备过程如下：①取游离甲状腺素抗原，加入二甲基亚砜溶解该抗原至浓度为20～50mg/mL，加入交联剂辛二酸二琥珀酰亚胺酯，室温反应2～3小时，用二甲基亚砜将反应液1 : 10稀释，于2～8℃下保存备用，其中：所述的游离甲状腺素抗原、所述碱性磷酸酶的纯度均大于等于95wt％，且所述碱性磷酸酶的比活性超过1000u/mg；②将含有碱性磷酸酶的缓冲液与步骤①所得溶液按照碱性磷酸酶与甲状腺素抗原与辛二酸二琥珀酰亚胺酯的连接物的摩尔比为1 : 1.1～1.3的比例混合，在室温下反应，使生成所述碱性磷酸酶标记的游离甲状腺素抗原，反应结束，将反应液通过G-25凝胶柱除盐，选择具有适当pH值的缓冲液调整浓度和pH值即得，其中碱性磷酸酶的缓冲液的浓度为0.5～1.5mg/ml，取浓度大于等于5mg/ml的碱性磷酸酶的磷酸盐缓冲液，用pH 9～10的碳酸氢钠缓冲液稀释至0.5～1.5mg/ml，加入步骤①所得反应液，室温静置反应20～60min；所述的包被有抗荧光素抗体的磁微粒的悬浮液的制备方法如下：使含有羧基活性基团的磁微粒与抗荧光素抗体在偶联剂碳二亚胺的存在下，室温反应2～18小时，反应结束，磁分离，去上清，用具有适当pH值的缓冲液调整pH和浓度，即得，其中所述的磁微粒具有超顺磁性，其直径为0.5～2μm，每克磁微粒上所带的羧基活性基团的含量不低于0.4mmol；所述的抗荧光素抗体为单克隆抗体或多克隆抗体，纯度大于等于90wt％，稀释效价大于1 : 100万；所述的具有适当pH值的缓冲液为含有0.5％牛血清白蛋白、pH8.0的TRIS缓冲液。。： 【当前权利人】江苏浩欧博生物医药股份有限公司 【当前专利权人地址】江苏省苏州市苏州工业园区星湖街218号生物纳米园C6栋101 【专利权人类型】有限责任公司(台港澳与境内合资) 【统一社会信用代码】91320594690261995C 【引证次数】9.0 【他引次数】9.0 【家族引证次数】9.0 【家族被引证次数】5

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