【摘要】 一种汞离子的等离子手性适配体传感器的制备方法，属于分析化学技术领域和食品安全技术领域。本发明的主要实施步骤为：(1)金纳米棒的合成；(2)金纳米棒表面定向核酸功能化；(3)利用定向核酸功能化的金纳米棒构建等离子手性适配体传感器；(4)等离子手性适配体传感器的表征；(5)等离子手性适配体传感器的特异性测定；(6)等离子手性适配体传感器的实际样本测定。随着Hg2+浓度的增加，金纳米棒侧面组装体中含有的金纳米棒的个数增加，组装体的摩尔椭圆度越大，本发明建立了摩尔椭圆度和汞离子浓度的线性关系，构建简单、灵敏和高特异性的等离子手性适配体传感器，用于检测汞离子的浓度。 【专利类型】发明授权 【申请人】江南大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】214122 江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学食品学院 【申请人地区】中国 【申请人城市】无锡市 【申请人区县】滨湖区 【申请号】CN201210360287.X 【申请日】2012-09-25 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102879336B 【公开公告日】2014-09-24 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102879336B 【授权公告日】2014-09-24 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N21/19 【发明人】胥传来; 徐丽广; 匡华; 刘丽强; 朱颖越; 赵媛; 胡拥明 【主权项内容】1.一种汞离子的等离子手性适配体传感器的制备方法，其特征在于金纳米棒表面定向核酸功能化、利用定向核酸功能化的金纳米棒构建等离子手性适配体传感器、等离子手性适配体传感器的表征、等离子手性适配体传感器的特异性测定和等离子手性适配体传感器的实际样本测定；工艺为 (1)金纳米棒表面定向核酸功能化 ①金纳米棒端面封闭：取制备好的10 nM的金纳米棒1000 μL，加入5 μL的1 mM的巯基修饰的分子量为5000的聚乙二醇溶液，振摇反应8h，7500r/min离心15min，弃上清，水洗一次，用1000 μL的水分散金纳米棒-聚乙二醇复合物，4℃保藏、待用； ②金纳米棒侧面定向修饰APTa：取步骤①所得的金纳米棒-聚乙二醇溶液500 μL，加入10 μL的100 μM的巯基修饰的APTa，混匀，室温振摇反应12h，7500r/min离心15min，弃上清，用500 μL的5 mM的十六烷基三甲基溴化铵溶液分散金纳米棒-聚乙二醇-APTa复合物，5 mM的十六烷基三甲基溴化铵溶液洗一次，再次用500 μL的5 mM的十六烷基三甲基溴化铵溶液分散金纳米棒-聚乙二醇-APTa复合物，4℃保藏、待用； ③金纳米棒侧面定向修饰APTb：取步骤①所得的金纳米棒-聚乙二醇溶液500 μL，加入10 μL的100 μM的巯基修饰的APTb，混匀，室温振摇反应12h，7500r/min离心15min，弃上清，用500 μL的5 mM的十六烷基三甲基溴化铵溶液分散金纳米棒-聚乙二醇-APTb复合物，5 mM的十六烷基三甲基溴化铵溶液洗一次，再次用500 μL的5 mM的十六烷基三甲基溴化铵溶液分散金纳米棒-聚乙二醇-APTb复合物，4℃保藏、待用； APTa：5’-SH-AAAAAAGTGACCATTTTTGCAGTG- 3’， APTb：5’-SH-CACTGCTTTTTTGGTCACAAAAAA-3’， (2)利用定向核酸功能化的金纳米棒构建等离子手性适配体传感器 圆二色谱检测，绘制摩尔椭圆度～汞离子浓度标准曲线：取50μL上述制备的APTa侧面定向修饰的金纳米棒和50μL上述制备的APTb侧面定向修饰的金纳米棒进行混匀，轻柔振摇反应5min，加入50μL不同浓度的汞离子标准品，40℃孵育1h后，借助T-Hg2+-T 特异性识别APTa和APTb分别修饰的金纳米棒形成金纳米棒侧面组装结构；由于加入的汞离子的标准品浓度的不同导致金纳米棒形成的链状结构的长度不同进而造成等离子手性传感器的手性信号产生差异；汞离子的标准品浓度分别为0 ng/mL、0.05 ng/mL、0.1 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL、5 ng/mL、10ng/mL；利用圆二色谱仪器测定不同汞离子浓度下的组装结构的摩尔椭圆度，根据730nm波长下测定的不同浓度的摩尔椭圆度，绘制汞离子浓度的标准曲线；本传感器的线性范围为0.05-10ng/mL，检测限为0.03ng/mL，标准曲线的线性方程为Y=0.5X-19.75，Y为不同浓度下730nm下的摩尔椭圆度，X为相应汞离子的浓度，线性相关性为>0.99； (3)等离子手性适配体传感器的表征 在汞离子不同浓度条件下，采用加速电压为200 keV的透射电镜、X射线能谱仪、激光动态光散射仪对金纳米棒自组装构建的手性适配体传感器进行表征，通过上述表征手段可知该种手性适配体传感器成功构建； (4)等离子手性适配体传感器的特异性测定 按照利用定向核酸功能化的金纳米棒构建等离子手性适配体传感器步骤中对汞离子测定的相同步骤测定其它的实际样本中有可能存在的4种重金属离子Cu2+、Cr6+、Fe2+和/或Zn2+，浓度均为10 ng/mL，通过测定上述4种重金属离子的一种或几种的摩尔椭圆度，与10 ng/mL的Hg2+所造成的等离子手性适配体传感器的摩尔椭圆度比较可知，该种等离子手性适配体传感器针对汞离子检测特异性强； (5)等离子手性适配体传感器的实际样本测定 将自来水作为实际样本进行验证该种方法针对汞离子的添加回收率，预先向所用的自来水样品中分别添加0.1 ng/mL、0.5 ng/mL、1 ng/mL及5 ng/mL的汞离子，采用等离子手性适配体传感器测定实际样本中的汞离子的添加回收率在94.81%-103.10%之间，标准差为3.5%，能够完全满足实际样品中对汞离子的检测需求。 【当前权利人】江南大学 【当前专利权人地址】江苏省无锡市滨湖区蠡湖大道1800号江南大学食品学院 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】1210000071780177X1 【引证次数】2.0 【自引次数】2.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】18

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