【摘要】 本发明涉及一种检测核糖核酸的方法，尤其是一种检测微小核糖核酸(microRNA)的方法，属于生物技术领域。利用不对称PCR扩增结合液相芯片技术，先在生物样品中加入定量的外源性microRNA，将microRNA进行预扩增及扩增得到扩增产物，并将修饰后的含有microRNA特征信息的特异性检测探针与荧光微球偶联制成液相芯片，扩增产物与液相芯片杂交后通过液相芯片检测仪检测，通过比较待检测microRNA的荧光信号与外源性microRNA的荧光信号的相对水平达到相对定量检测microRNA的目的，为microRNA的定量检测提供新的途径。 【专利类型】发明申请 【申请人】江苏省疾病预防控制中心 【申请人类型】机关团体 【申请人地址】210009 江苏省南京市江苏路172号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】鼓楼区 【申请号】CN201010539260.8 【申请日】2010-11-11 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101962685A 【公开公告日】2011-02-02 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN101962685B 【授权公告日】2012-09-19 【授权公告年份】2012.0 【IPC分类号】C12Q1/68; G01N21/64 【发明人】崔仑标; 葛以跃; 史智扬; 戚宇华; 赵康辰; 单云峰; 周明浩; 汪华 【主权项内容】一种基于液相芯片检测微小核糖核酸的方法，包括以下步骤：步骤一、制备液相芯片，从Sanger MiRBase数据库中选取成熟的microRNA序列作为探针序列, 在所述探针序列的5’端加上C12 分子臂和氨基修饰，并将修饰后的探针与不同编码的荧光微球偶联，得到特异性检测微球，即液相芯片；步骤二、设计引物和探针，在所述成熟的microRNA序列后8位反向互补序列的5’端加上CTCAACTGGTGTCGTGGAGTCGGCAATTCAGTTGAG组成反转录引物，剩余序列的5’端加上ACACTCCAGCTGGG组成正向引物；并设计通用正、反向引物，在通用反向引物5’端第1位及第5位T碱基以生物素标记，在通用正向引物的第3位和第5位碱基进行锁核酸修饰；步骤三、在待检测的RNA中加入外源性人工合成的2种microRNA ，加入量为每50 ng待测RNA各加5 fmol；步骤四、对待测样品RNA进行反转录反应，得到合成的cDNA；步骤五、对所述cDNA进行预扩增反应，得到预扩增产物；步骤六、对所述预扩增产物进行不对称PCR扩增反应，得到待测样品的PCR扩增产物；步骤七、将所述待测样品的PCR扩增产物与特异性检测微球杂交，得到杂交反应产物；步骤八、将所述杂交反应产物离心弃上清后，与链霉菌抗生物素蛋白‑藻红蛋白反应，得到反应产物；步骤九、用液相芯片检测仪对步骤八中的反应产物进行检测，得到检测结果。 【当前权利人】江苏省疾病预防控制中心 【当前专利权人地址】江苏省南京市江苏路172号 【引证次数】3.0 【被引证次数】13 【他引次数】3.0 【被他引次数】13.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】14

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