【摘要】 本发明属于食品质量安全检测技术领域。具体涉及应用快速共增菌、细菌基因组提取、多重Taqman荧光定量PCR的流程对食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌进行同时快速检测，并设计用以保证检测结果准确性的重组阳性内参DNA监控PCR反应。结果表明，以上方法具有良好的针对目标致病菌的特异性，检测限可达101cfu/PCR反应，且反应体系各组分间未见交叉干扰。对人工污染的食品盲样检测验证了方法的实用性。阳性内参DNA有效地保证了检测的可靠性，避免了假阴性结果的出现。总之，本发明建立了一种食品中金黄色葡萄球菌、沙门氏菌和志贺氏菌同时快速检测的多重荧光定量PCR方法，为食源性致病菌的高通量检测提供了新的方法。 【专利类型】发明申请 【申请人】南京市产品质量监督检验院 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】210028 江苏省南京市玄武区红山路168号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】玄武区 【申请号】CN201010550133.8 【申请日】2010-11-19 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101974641A 【公开公告日】2011-02-16 【公开公告年份】2011 【IPC分类号】C12Q1/68; C12Q1/14; C12Q1/10; G01N21/64 【发明人】杨军; 张驰; 凌睿; 刘新梅; 周骏贵 【主权项内容】一种对食品中的沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌进行同时快速检测的多重荧光定量PCR方法，其特征是由以下步骤构成：  (1)应用一定配比的含7.5%氯化钠肉汤和GN的混合培养基对含有上述致病菌的食品进行快速同时增菌，并使用离心柱式细菌基因组DNA提取试剂盒提取培养液中的细菌基因组总DNA；  (2)应用根据沙门氏菌的复制原点C基因、金黄色葡萄球菌的Nuc基因、志贺氏菌的IpaH基因设计的扩增引物和Taqman探针对上述细菌基因组总DNA进行多重荧光定量PCR同时检测，并使用自行设计的重组DNA片段作为阳性内参监控反应体系，根据分别代表三种致病菌的荧光信号在一定循环数内是否出现显著扩增判定食品中是否存在上述致病菌。。 【当前权利人】南京市产品质量监督检验院 【当前专利权人地址】江苏省南京市玄武区红山路168号 【统一社会信用代码】12320100425802498N 【引证次数】2.0 【被引证次数】10 【他引次数】2.0 【被他引次数】10.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】10

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