【摘要】 本发明涉及一种快速测定梨果实细胞大小和形态的方法，属于植物生理及生物化学领域。本发明以山梨醇溶液作为平衡细胞内外渗透压的介质，通过加热、搅拌，促使碳酸钠快速地溶解梨果实细胞壁及胞间层的果胶质，导致细胞游离释放，达到快速测定果实细胞大小和形态的目的。这一方法的优势是将化学处理和加热煮沸相结合，快速杀死细胞，阻止细胞在分离过程中出现变化，利于细胞大小和形态的测定。步骤包括：细胞分离液的配制，果实组织块的切分，细胞的分离纯化和收集测定等过程。本方法不涉及酶解和组织制片过程，具有快速准确、操作简单、成本低廉、无污染，不需样品的特殊处理等优点，在效率上远远高于目前的方法，应用十分广泛。 【专利类型】发明申请 【申请人】南京农业大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】210095 江苏省南京市卫岗1号 【申请人地区】中国 【申请人城市】南京市 【申请人区县】玄武区 【申请号】CN201010596053.6 【申请日】2010-12-20 【申请年份】2010 【公开公告号】CN102102120A 【公开公告日】2011-06-22 【公开公告年份】2011 【IPC分类号】C12Q1/02 【发明人】张绍铃; 张虎平; 陶书田; 王鑫; 秦改花; 吴俊; 吴华清; 齐开杰 【主权项内容】1.一种快速测定梨果实细胞大小和形态的方法，具体操作步骤如下：1)细胞分离液的配制：根据所配溶液终体积X和终浓度为0.3M山梨醇和0.05M碳酸钠，分别称取相应质量的山梨醇和碳酸钠，用烧杯加2/3 X体积的蒸馏水溶解山梨醇，待山梨醇溶解完全后加入称取的碳酸钠充分溶解，最后用蒸馏水定容到X体积待用；2)果实组织块的切分：切取果实组织的部位，并切块；3)细胞分离：将果实组织切块放入1倍体积的细胞分离液中，用保鲜膜封口，以防水分过多蒸发，加热并搅拌煮沸后保持3-5分钟，再减缓加热并继续搅拌，直到可观察到烧杯内出现云雾状即停止加热和搅拌，获得含有分离细胞的细胞分离液；4)细胞纯化：待冷却后，将含有分离细胞的细胞分离液用纱布过滤，去除未分离的细胞团和残留的维管束细胞及碎片；5)细胞收集：将过滤好的细胞分离液转入到离心管中，静置1h使分离的细胞沉于管底，倾去上清液，获得分离细胞，或立即使用，或置4 ℃下储存备用；6)细胞大小和形态的测定：用微量移液器吸取20～30μl悬浮液滴到载玻片上，在显微镜下观察拍照形态，测定细胞大小。 【当前权利人】南京农业大学 【当前专利权人地址】江苏省南京市卫岗1号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12100000466007562R 【被引证次数】1 【被他引次数】1.0 【家族被引证次数】1

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