【摘要】 本发明公开了与甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-2连锁的分子标记的方法及其应用。本发明利用携带蔓枯病抗性基因Gsb-2的PI 157082与感病地方品种“白皮脆”构建F2群体，通过苗期人工接种甜瓜蔓枯病菌分生孢子悬浮液，采用ISSR技术获得与Gsb-2连锁的分子标记ISSR-57560。将分子标记ISSR-57560用于以PI 157082为亲本的甜瓜品种或品系的基因型检测，可以判断该品种或品系是否抗甜瓜蔓枯病。本发明克服了现有技术在选育稳定甜瓜蔓枯病抗病品系难度较大、周期较长的缺陷，为甜瓜的蔓枯病抗病育种提供标记辅助选择的技术，从而降低成本、提高选择效率，加快培育优良抗蔓枯病甜瓜品系的进程。 【专利类型】发明申请 【申请人】新疆农业科学院哈密瓜研究中心 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】830011 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市南昌路403号 【申请人地区】中国 【申请人城市】乌鲁木齐市 【申请人区县】新市区 【申请号】CN201010590684.7 【申请日】2010-12-16 【申请年份】2010 【公开公告号】CN102140506A 【公开公告日】2011-08-03 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN102140506B 【授权公告日】2013-04-17 【授权公告年份】2013.0 【IPC分类号】C12Q1/68 【发明人】张永兵; 伊鸿平; 张龑; 张学军; 李寐华; 吴海波; 王登明 【主权项内容】 1.一种与甜瓜抗蔓枯病基因Gsb-2连锁的分子标记获得方法，其特征在于，所述的获得方法包括以下步骤：(1)以甜瓜资源PI 157082为蔓枯病抗源，选用PI 157082携带的蔓枯病抗性基因Gsb-2，抗性基因Gsb-2为显性遗传；(2)将甜瓜蔓枯病感病地方品种“白皮脆”为母本与甜瓜蔓枯病抗病资源PI157082为父本进行杂交，得到杂种F1；(3)由杂种F1自花授粉获得F2代群体，提取每个F2代群体单株的基因组DNA；(4)通过苗期抗病性鉴定，接种甜瓜蔓枯病菌分生孢子悬浮液14d后调查病害情况，根据甜瓜茎部病斑大小不同，将病害划分为1-5个等级，并根据病害分级情况，将分级数转换为单个植株的抗病或感病表现型；(5)从F2代群体中，取表现型抗病的多个单株等量的基因组DNA构建抗病基因混合池，表现型感病的多个单株等量的基因组DNA构建感病基因混合池；(6)以抗病基因池和感病基因池DNA为模板，进行多态性ISSR引物的筛选扩增，ISSR扩增产物在1.5％琼脂糖凝胶上电泳分离后，获得多态性ISSR引物；(7)根据已获得的在抗病基因池和感病基因池之间具有多态性3条引物ISSR-12、ISSR-45和ISSR-57，进一步以抗病资源PI 157082、感病地方品种“白皮脆”、杂种F1以及用于构建抗感基因池的抗病F2单株、感病F2单株验证，获得与甜瓜蔓枯病抗性基因连锁的分子标记ISSR-57560；(8)根据已获得的分子标记ISSR-57560，对F2代群体单株扩增检测并进行遗传分析，获得连锁的分子标记资料；(9)将F2代群体单株的抗病、感病表现型与分子标记进行遗传连锁性分析，以3.0为最小LOD阀值，确定与甜瓜蔓枯病抗性基因Gsb-2连锁的分子标记ISSR-57560。 【当前权利人】新疆农业科学院哈密瓜研究中心 【当前专利权人地址】新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市南昌路403号 【统一社会信用代码】12650000676336276W 【引证次数】4.0 【被引证次数】9 【他引次数】4.0 【被他引次数】9.0 【家族引证次数】4.0 【家族被引证次数】9

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