【摘要】 本发明的一种新的伪狂犬病活疫苗的效力检验方法，其中Vero细胞的制备：抽取密度为2.0×106的Vero细胞1.5ml，置于37℃水浴中，快速晃动溶解4-5分钟，在2000rmp/min条件下，离心5分钟，弃去上清，加入1-3ml细胞培养液，置于37℃、5%的CO2培养箱中培养，培养48小时后，用浓度0.25%的EDTA-胰酶消化液消化细胞后再用细胞营养液稀释成2.0×106的Vero细胞悬液，铺到细胞板上，置于37℃、5%的CO2培养箱中培养，培养24小时后长成致密单层备用；抽取1头份伪狂犬病毒活疫苗，用细胞维持液作10倍的梯度稀释，取样分别加入上述的致密单层的96孔细胞板中，每孔加细胞维持液，放入37℃、5％的CO2培养箱中培养，观察3-5天细胞病变，采用Reed-Muench法计算TCID50/0.1ml效价，每头份病毒含量应不低于5×103.0TCID50。 【专利类型】发明申请 【申请人】新疆天康畜牧生物技术股份有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】830032 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市头屯河工业园金屯路109号 【申请人地区】中国 【申请人城市】乌鲁木齐市 【申请人区县】头屯河区 【申请号】CN201010588322.4 【申请日】2010-12-15 【申请年份】2010 【公开公告号】CN102094064A 【公开公告日】2011-06-15 【公开公告年份】2011 【发明人】贺笋; 杜久斌; 李延涛; 刘淑梅; 黄炯; 赵钦; 赵海源 【主权项内容】1.一种新的伪狂犬病活疫苗的效力检验方法，其特征在于：采用Vero细胞测定伪狂犬病毒活疫苗TCID50的方法，分步如下；其中Vero细胞的制备： 抽取密度为2.0×106的Vero冻存细胞1.5ml，置于37℃水浴中，晃动溶解4-5分钟，在2000rmp/min条件下，离心5分钟，弃去上清，加入1-3ml细胞培养液，转入培养瓶中，置于37℃、5%的CO2培养箱中培养，培养48小时后，用浓度0.25%的EDTA-胰酶消化细胞，再用细胞营养液稀释成2.0×106的Vero细胞悬液，铺到细胞板上，置于37℃、5%的CO2培养箱中培养，培养24小时成致密单层备用；其中伪狂犬病活疫苗的接种：抽取1头份伪狂犬病活疫苗，用细胞维持液作10倍的梯度稀释，取10-3-10-7的滴度样，分别加入上述的致密单层中，每孔100ul，同时设对照每孔加细胞维持液100ul，放入37℃、5％的CO2培养箱中培养，观察3-5天细胞病变，计算TCID50/0.1ml效价，每头份病毒含量应不低于5×103.0TCID50。 ： 【当前权利人】新疆天康畜牧生物技术股份有限公司 【当前专利权人地址】新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市头屯河工业园金屯路109号 【专利权人类型】股份有限公司 【统一社会信用代码】91650000722362767Q 【被引证次数】7 【被自引次数】1.0 【被他引次数】6.0 【家族被引证次数】7

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