【摘要】 本发明公开的两个MSTN-shRNA慢病毒载体的构建和对MSTN基因的抑制，其中1)根据GeneBank中绵羊MSTN基因从启始密码(ATG)至终止密码(TGA)共1128bp编码区序列；2)人工设计合成并筛选到两条对绵羊MSTN基因有显著抑制作用的shRNA分子，且一条shRNA分子由上下游两条DNA互补单链组成；3)将合成的两条互补单链经退火形成双链的shRNA分子后，分别连接到pLL3.7慢病毒干扰载体上，构建了2个慢病毒RNA干扰质粒(MSTN-shRNA)；4)通过荧光定量PCR及Western b1ot从mRNA及蛋白水平分析了MSTN的表达，在mRNA水平上抑制效率可达58％以上，而对MSTN蛋白的抑制可达80％以上；5)完成对MSTN-shRNA慢病毒的制备、浓缩及测定。 【专利类型】发明申请 【申请人】新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国 澳大利亚绵羊育种研究中心 【申请人类型】科研单位 【申请人地址】831300 新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区克拉玛依东街151号 【申请人地区】中国 【申请人城市】乌鲁木齐市 【申请人区县】沙依巴克区 【申请号】CN201010580055.6 【申请日】2010-12-09 【申请年份】2010 【公开公告号】CN102181481A 【公开公告日】2011-09-14 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN102181481B 【授权公告日】2013-10-02 【授权公告年份】2013.0 【IPC分类号】C12N15/867 【发明人】刘明军; 刘晨曦; 李文蓉; 张雪梅; 唐森 【主权项内容】1.两个MSTN-shRNA慢病毒载体的构建和对MSTN基因的抑制，其特征在于：1)根据GeneBank中绵羊MSTN基因从启始密码(ATG)至终止密码(TGA)共1128bp编码区序列；2)人工设计合成并筛选到两条对绵羊MSTN基因有显著抑制作用的shRNA分子，该分子是由核苷酸组成的特定序列，且一条shRNA分子由上下游两条DNA互补单链组成，其中一的上游序列为5‘-ATCTCTTGAATGTCTTATAGCATCTTTGCA-3’；下游序列为5‘-TCGAGAAAAAAGCAAAGATGCTATAAGACATCTCTTGAATGTCTTATAGCATCTTTGC A-3‘，其中二的上游序列5’-TGTACAAGGTATACTGGAATTTCAAGAGAATTCCAGTATACCTTGTACTTTTTTC-3’；下游序列5’-AAAAAAGTACAAGGTATACTGGAATTCTCTTGAAATTCCAGTATACCTTGTAC A-3’；3)将合成的两条互补单链经退火形成双链的shRNA分子后，分别连接到pLL 3.7慢病毒干扰载体上，构建了2个慢病毒干扰RNA质粒(MSTN-shRNA)；4)通过定量荧光PCR及Western blot从mRNA及蛋白水平分析了MSTN的表达，在mRNA水平上抑制效率可达58％以上，而对MSTN蛋白的抑制可达80％以上；5)完成对MSTN-shRNA慢病毒的制备、浓缩及测定。 【当前权利人】新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国 澳大利亚绵羊育种研究中心 【当前专利权人地址】新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市沙依巴克区克拉玛依东街151号 【引证次数】2.0 【被引证次数】2 【自引次数】1.0 【他引次数】1.0 【被他引次数】2.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】2

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