【摘要】 本发明涉及到一种人脐带间充质干细胞的制备方法，它包括脐带的采集、运输、交接、分离、冻存、复苏、原代培养和传代培养，工艺简便、生产成本低、冻存效果好、细胞损伤少，最大限度降低冻存保护液在组织块复苏后细胞内的残留，毒副作用小，对人体无伤害，制备出的间充质干细胞可以用于临床治疗多种疾病。 【专利类型】发明申请 【申请人】江苏省北科生物科技有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】225300 江苏省泰州市中国医药城滨河路1号 【申请人地区】中国 【申请人城市】泰州市 【申请人区县】海陵区 【申请号】CN201010528733.4 【申请日】2010-11-03 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101974484A 【公开公告日】2011-02-16 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN101974484B 【授权公告日】2013-01-30 【授权公告年份】2013.0 【IPC分类号】C12N5/0775 【发明人】杨兵; 欧阳溪; 宋云庆; 胡祥 【主权项内容】一种人脐带间充质干细胞的制备方法，包括以下步骤：(1)脐带的采集胎儿娩出后即刻按产科常规结扎断脐截取脐带，用生理盐水冲洗脐带，再用医用酒精消毒，将脐带置于脐带保存液中2‑8℃恒温保存，从母体中抽取母血以及从胎盘端抽取脐血各不少于4ml作为检测样本，从胎盘端另抽取脐血4ml做收集血清用；(2)脐带的运输将脐血、母血检测样本和置于脐带保存液中保存的脐带送至交接实验室；(3)脐带的交接交接实验室登记后将脐血、母血检测样本交给质控实验室做微生物学和免疫学检测，将脐带转交分离实验室分离；(4)脐带的分离脐血、母血检测样本检测合格后，将步骤(3)转交至分离实验室的脐带分离成1‑3mm3的组织块；(5)组织块的冻存将组织块浸入2‑8℃的冻存保护液中5‑10分钟后分装到2ml的冻存管中，并将冻存管置于程序降温盒中放入‑80℃冰箱，8‑20小时后将冻存管转移至液氮罐内保存；(6)组织块的复苏将装有脐带组织块的冻存管于37℃水浴锅中解冻2‑5分钟，将脐带组织块经复苏缓冲液洗涤1‑5次后接种至含有完全培养基的培养瓶中；(7)原代培养将接种组织块的培养瓶置于37℃、含5％的CO2、饱和湿度的培养箱中培养，每3天更换一次完全培养基，培养10‑20天后得到P0代脐带间充质干细胞；(8)传代培养待脐带间充质干细胞P0代长至细胞融合80％‑90％后传代，依此扩增可得到P5代的间充质干细胞。 【当前权利人】江苏省北科生物科技有限公司; 深圳市北科生物科技有限公司 【当前专利权人地址】江苏省泰州市药城大道1号120室; 广东省深圳市南山区粤海街道高新南九道59号北科大厦16楼 【专利权人类型】有限责任公司 【统一社会信用代码】913212916720469414 【引证次数】3.0 【被引证次数】50 【他引次数】3.0 【被自引次数】8.0 【被他引次数】42.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】51

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