【摘要】 本发明公开了前哨淋巴结快速诊断试剂盒，由大鼠抗人moc-31抗体、大鼠抗人CD44v6-FITC抗体、大鼠抗人her-2-percp抗体和大鼠抗人Mucin1-PE抗体四种抗体制备而成，其制备检测方法包括前哨淋巴结单细胞悬液的制备、免疫磁珠的预洗、moc-31抗体的标记、细胞分离、细胞洗脱和流式细胞分析，本发明的优点在于：操作较为方便，用时较少，整个过程能在60-70分钟内完成。并且其与传统的术中冰冻HE染色和CK-IHC相比，在前哨淋巴结转移诊断的敏感性和假阴性率方面有明显的优势。。 【专利类型】发明申请 【申请人】江阴诺格生物科技有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】214431 江苏省无锡市江阴经济开发区砂山路85号(6楼A4)百桥生物园 【申请人地区】中国 【申请人城市】无锡市 【申请人区县】江阴市 【申请号】CN201010512724.6 【申请日】2010-10-20 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101975860A 【公开公告日】2011-02-16 【公开公告年份】2011 【授权公告号】CN101975860B 【授权公告日】2013-09-11 【授权公告年份】2013.0 【IPC分类号】G01N33/577; G01N33/532 【发明人】鞠景芳; 卢斌峰; 严俊 【主权项内容】前哨淋巴结快速诊断试剂盒，其特征在于：由大鼠抗人moc‑31抗体、大鼠抗人CD44v6‑FITC抗体、大鼠抗人her‑2‑percp抗体和大鼠抗人Mucin1‑PE抗体四种抗体制备而成，其制备检测方法如下：(1)前哨淋巴结单细胞悬液的制备：将前哨淋巴结组织用生理盐水湿润，剥离淋巴结表面的脂肪及结缔组织，将前哨淋巴结分为四份，将其中两部分分别进行冰冻HE染色及CK‑IHC染色，剩余的两部分行免疫磁珠分离，并充分剪碎，研磨，冲洗，收集细胞，将所收集的单细胞悬液通过滤器除菌，离心，弃上清；(2)免疫磁珠的预洗：按照每个靶细胞约4‑8个磁珠的比例，加入适量的磁珠，置于无菌的聚丙烯管中，将磁珠重悬于TRIS‑EDTA 缓冲液中，混匀，将聚丙烯管分别置于磁性分离架上分离，吸取上层清液，将聚丙烯管中的磁珠重悬于缓冲液中冲洗；(3)moc‑31抗体的标记：将所需量的moc‑31抗体加入前哨淋巴结的单细胞悬液中，共育，然后离心，弃上清，重悬下层沉淀于 TRIS‑EDTA 缓冲液中；(4)细胞分离：将所得前哨淋巴结单细胞悬液加入预洗过的磁珠中，并混合，避光、共育，置于磁性分离架上进行细胞分离，弃上清，并重悬磁珠于TRIS‑EDTA 缓冲液中；(5)细胞洗脱：在每管冻干的Dnase I中加入CollectionReleasing Buffer II，溶解，混匀，分装洗脱液，低温保存，将磁珠重悬于含0.1% FCS(Fetal Calf Serum)的buffer 3(Buffer 3 配方：PBS+0.1%BSA)中预处理，分离缓冲液加入到各管中，充分吹匀，使细胞洗脱最大化，磁性分离，将已洗脱的细胞上清液置于已预处理的聚丙烯管中，将剩下的磁珠重悬于buffer3中；(6)流式细胞分析：将免疫磁珠分离所富集的细胞产品重悬于缓冲液中，并置于流式管中，加入鼠抗人CD44V6‑FITC单抗、鼠抗人her‑2‑percp单抗、大鼠抗人Mucin 1‑PE单抗，离心，弃上层清液，将所得的细胞重洗，洗去残余抗体，将细胞重悬于多聚甲醛或PBS中，上流式仪检测定量  。 【当前权利人】常州微诊生物医药科技有限公司 【专利权人类型】有限责任公司 【统一社会信用代码】91320281683522173W 【引证次数】2.0 【他引次数】2.0 【家族引证次数】2.0

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