【摘要】 本发明公开了融合蛋白一步催化制备N-乙酰神经氨酸的方法，属于生物工程技术领域。利用重叠PCR技术，将N-乙酰葡萄糖胺-2-差向异构酶和N-乙酰神经氨酸醛缩酶的基因连在一起，导入毕赤酵母宿主细胞中，从而获得具有活性的融合蛋白，该融合蛋白在反应器中催化N-乙酰葡萄糖胺和丙酮酸及其盐转化生成N-乙酰神经氨酸。本发明通过重叠PCR技术将两个酶融合，一步催化制备N-乙酰神经氨酸，显著简化了生产工艺流程和降低生产成本。由于融合蛋白中两酶的活性中心位点邻近，使得酶促反应的效率得到了极大的提高。本发明总的转化效率达到了60％以上，并且能在30h内完成催化反应，该方法操作简便，对N-乙酰神经氨酸在工业大规模生产上有较大意义。 【专利类型】发明申请 【申请人】扬州博生源生物科技有限公司 【申请人类型】企业 【申请人地址】225200 江苏省扬州市江都市仙女镇砖桥村新东组 【申请人地区】中国 【申请人城市】扬州市 【申请人区县】江都区 【申请号】CN201010282400.8 【申请日】2010-09-10 【申请年份】2010 【公开公告号】CN101979644A 【公开公告日】2011-02-23 【公开公告年份】2011 【IPC分类号】C12P19/26; C12N15/60; C12N15/61; C12N15/81; C12N9/00; C12N9/88; C12N9/90 【发明人】梅松 【主权项内容】融合蛋白一步催化制备N‑乙酰神经氨酸的方法，其特征是包括以下步骤：(1)利用重叠PCR技术，将N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶和N‑乙酰神经氨酸醛缩酶的基因连在一起，导入毕赤酵母宿主细胞中，从而获得具有N‑乙酰葡萄糖胺‑2‑差向异构酶和N‑乙酰神经氨酸异构酶活性的融合蛋白；(2)催化反应体系的pH为6.5‑8.0，反应温度为30‑40℃，N‑乙酰葡萄糖胺与丙酮酸及其盐的重量比为1‑1.8，将N‑乙酰葡萄糖胺和丙酮酸及其盐与游离的融合酶蛋白或者固定化的融合蛋白混匀，反应得到混合物；(3)从反应混合物分离制备N‑乙酰神经氨酸。。 【当前权利人】扬州博生源生物科技有限公司 【当前专利权人地址】江苏省扬州市江都市仙女镇砖桥村新东组 【专利权人类型】有限责任公司 【统一社会信用代码】913210126945435786 【引证次数】2.0 【被引证次数】8 【他引次数】2.0 【被他引次数】8.0 【家族引证次数】2.0 【家族被引证次数】8

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