【摘要】 本发明涉及微生物筛选和培养领域，尤其涉及一种活的非可培养(VBNC)菌种的复苏培养基及其制备方法和应用。一种能促进VBNC细菌生长并提高分离丰度的复苏培养基，该复苏培养基由培养基基液、细菌液和土壤液构成；所述的细菌液由藤黄微球菌菌种在菌种液体培养基上培养至对数期后期，经离心去除菌种液体培养基提取获得蛋白质，含有复活促进因子Rpf，细菌液按体积比为培养基基液的0.5-30%；所述的土壤液由经风干、过筛、去除杂质的土壤，加水，多次灭菌，过滤取滤液或离心取上清液，土壤液按体积比为培养基基液的0.1-20%。本发明利用复活促进因子Rpf，同时加入土壤液，构建成复苏培养基，能够进一步促进VBNC细菌复苏生长，提高了从生态环境中分离VBNC细菌丰度。本发明具有操作简单、复苏快的特点。 【专利类型】发明授权 【申请人】浙江师范大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】321004 浙江省金华市迎宾大道688号 【申请人地区】中国 【申请人城市】金华市 【申请人区县】婺城区 【申请号】CN201210081126.7 【申请日】2012-03-26 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102618464B 【公开公告日】2014-07-23 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102618464B 【授权公告日】2014-07-23 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12N1/20; C12Q1/04 【发明人】丁林贤; 陈建荣; 金夷; 林冬珍 【主权项内容】1.一种能促进VBNC细菌生长并提高分离丰度的复苏培养基，其特征在于：该复苏培养基由培养基基液、细菌液和土壤液构成；所述的细菌液由取少量藤黄球菌菌种接种于菌种液体培养基，25~35?C、100~150rpm振动培养；细菌生长至对数期后期，培养液用3000~8000rpm，10~30min离心抽提去除菌体；经0.20~0.25μm膜过滤灭菌后，-30~-10℃保存备用，含有复活促进因子Rpf，细菌液按体积比为培养基基液的1-30%；所述的土壤液由取经风干、过筛、去除杂质的园土1kg，加自来水1~2L，110~130℃、10~40min高压灭菌锅灭菌；室温待一晚后，再度用同法灭菌；1500~2500r/min低速离心取上清液或用滤纸过滤弃渣获得滤液，经110~130℃、10~30min高压灭菌锅灭菌后冷却，-30~-10℃保存备用，土壤液按体积比为培养基基液的1-20%。 【当前权利人】浙江师范大学 【当前专利权人地址】浙江省金华市迎宾大道688号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】12330000470003513H 【引证次数】2.0 【他引次数】2.0 【家族引证次数】4.0 【家族被引证次数】6

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