【摘要】 。本发明公开了抗鳗弧菌卵黄抗体及其制备方法、效价检测方法和应用，特点是采用鳗弧菌为抗原免疫蛋鸡，收集高免疫鸡蛋，将免疫鸡蛋卵黄进行分离和纯化得到抗鳗弧菌卵黄抗体，包括制备鳗弧菌抗原并灭活步骤；将蛋鸡进行1次基础免疫和2～3次加强免疫并收集鸡蛋的步骤；最后通过离心分离、盐析和透析得到产品的步骤；并采用间接酶联免疫吸附试验检测抗鳗弧菌卵黄抗体的效价，该鳗弧菌卵黄抗体可用于由鳗弧菌引起的疾病的预防和治疗上，并可用于开发鳗弧菌检测试剂盒和免疫学上的免疫反应及诊断，优点是该卵黄抗体纯度较高，且对鳗弧菌有较强的抑制作用，同时高免卵黄的获取廉价、方便便于低成本、大批量生，其制备方法简便易行。 【专利类型】发明授权 【申请人】宁波大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】315211 浙江省宁波市江北区风华路818号 【申请人地区】中国 【申请人城市】宁波市 【申请人区县】江北区 【申请号】CN201210019152.7 【申请日】2012-01-20 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102532312B 【公开公告日】2014-03-12 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102532312B 【授权公告日】2014-03-12 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C07K16/12; C07K16/02; G01N33/569; A61K39/40; A61P31/04 【发明人】李登峰; 周永强; 刘联国; 郭安南; 彭娇; 陈炯; 顾晓英 【主权项内容】一种抗鳗弧菌卵黄抗体的制备方法，其特征在于包括以下步骤：(1)制备鳗弧菌抗原并灭活接种鳗弧菌于LB固体琼脂培养基，28℃倒置培养18h后，挑取单菌落接种于LB液体培养基中，在28℃，160rpm的条件下，摇床振荡培养10h后，调节LB液体培养基中的鳗弧菌菌量为2×109CFU/ml，然后离心分离得到含有鳗弧菌的沉淀物和上清液，将沉淀物与无菌生理盐水混合得到鳗弧菌菌量为2×109CFU/ml的菌悬液，加入甲醛使甲醛体积终浓度达0.5%，然后37℃恒温水浴灭活24h，即得到灭活的鳗弧菌抗原，放4℃冰箱备用；(2)免疫蛋鸡并收集鸡蛋将蛋鸡进行1次基础免疫和2～3次加强免疫，所述的基础免疫为在步骤(1)得到的鳗弧菌抗原中加入等量的弗氏完全佐剂，充分乳化后对蛋鸡进行注射免疫，所述的加强免疫为在步骤(1)得到的鳗弧菌抗原中加入等量的弗氏不完全佐剂，充分乳化后对蛋鸡进行注射免疫，每次免疫间隔15天，完成免疫后10天，开始收集鸡蛋，于4℃冰箱保存；(3)卵黄抗体分离和纯化将步骤(2)得到的免疫鸡蛋用酒精擦拭蛋壳并分离卵黄，然后在卵黄中加入卵黄体积10倍的乙酸-乙酸钠缓冲液，混匀后于4℃冰箱静置10h，然后在4℃，10000g条件下离心20min，得到初提纯液，将初提纯液进行盐析，将盐析得到的沉淀用与卵黄等体积的浓度为0.01mol/L的pH为7.2的PBS缓冲液重悬，最后用截留量为100KD的透析袋透析除盐得到抗鳗弧菌卵黄抗体，其中所述的盐析过程为：首先向初提纯液中加入终饱和度为40%的饱和(NH4)2SO4，4℃冰箱静置10h后，4℃，10000g，离心20min得到一次沉淀；然后将一次沉淀用140g/LNa2SO4重悬浮，4℃冰箱静置10h后，4℃，10000g，离心20min得到二次沉淀，所述的二次沉淀即为盐析得到的沉淀。 【当前权利人】宁波大学 【当前专利权人地址】浙江省宁波市江北区风华路818号宁波大学 【统一社会信用代码】123300004195291066 【家族被引证次数】7

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