【摘要】 一种检测新鲜烟叶中次生代谢物的衍生化GC-MS方法，其特征是：快速采集新鲜烟叶并用液氮现场进行速冻，采用冷冻干燥方法除去水分后对烟叶进行粉碎，用溶剂超声提取烟粉中次生代谢物，对提取液上清液进行干燥，然后对干燥后提取物进行肟化反应、硅烷衍生化反应，最后采用GC-MS进行分析。本发明的突出优点在于：一是发展了适用于新鲜烟叶中次生代谢物的提取方法。由于烟叶面积较大，次生代谢物在整个烟叶分布并不均匀，不适合采用打孔取样技术采用。而本发明的烟叶采集及提取方法可以真实反应所在采集周期、采集部位烟叶的代谢物组成。二是可以同时检测新鲜烟叶中糖类、氨基酸类、有机酸类、萜醇类等大部分重要的烟草代谢物，具有高通量检测特性。 【专利类型】发明授权 【申请人】中国烟草总公司郑州烟草研究院 【申请人类型】企业 【申请人地址】450001 河南省郑州市高新区枫杨街2号 【申请人地区】中国 【申请人城市】郑州市 【申请人区县】中原区 【申请号】CN201210015657.6 【申请日】2012-01-18 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102590412B 【公开公告日】2014-06-25 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102590412B 【授权公告日】2014-06-25 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】G01N30/88; G01N30/06 【发明人】王晓瑜; 谢复炜; 秦亚琼; 张丽; 刘惠民; 杨军; 丁丽; 王昇; 贾云祯 【主权项内容】1.一种检测新鲜烟叶中次生代谢物的衍生化GC-MS方法，其特征在于：快速采集新鲜烟叶并用液氮现场进行速冻，采用冷冻干燥方法除去水分后对烟叶进行粉碎，用溶剂超声提取烟粉中次生代谢物，对提取液上清液进行干燥，然后对干燥后提取物进行肟化反应、硅烷衍生化反应，最后采用GC-MS进行分析，其具体步骤如下：(1) 烟叶的采集、处理、干燥、粉碎：快速采摘烟株指定部位烟叶，用锡箔纸包裹叶片部分，用液氮迅速冷冻以终止生命过程，冷冻干燥24h以除去烟叶水分，干燥过的烟叶粉碎至40-60目，放于-20℃冰箱保存；(2) 烟叶中次生代谢物的萃取：称量10-30mg粉碎后的烟叶于1.5ml离心管中，加入内标溶液，用甲醇-氯仿-水萃取溶剂超声提取，萃取溶剂甲醇-氯仿-水的配比为5∶2∶2，超声萃取后离心，取上清液并用氮吹仪吹干，所述内标溶液为用萃取溶剂配制的氘代十六烷酸溶液；(3)肟化反应：向吹干的提取液基质中加入甲氧胺盐酸盐溶液，所用甲氧胺盐酸盐溶液浓度为20-40mg/ml，配置在吡啶溶液中，加入量为30-70μl，旋转震荡后在30-40℃下反应70-100min，反应采用水浴或摇床空气加热进行控温；(4)硅烷化衍生反应：在步骤(3)之后，向离心管中加入N-甲基-N-三甲基硅烷基三氟乙酰胺(MSTFA)，加入量为30-120μl，旋转震荡后在30-40℃下衍生 25-35min，反应采用水浴或摇床进行控温；(5) 检测：采用GC-MS进行检测分析，色谱条件如下：色谱柱： DB-5ms ，规格30m×0.25mm×0.25μm； 载气，He；流速：1.0ml/min；进样口温度：290℃；进样量：1μL；分流比为10 : 1；升温程序：60℃保持4min，然后以5℃/min的升温速度升到310℃，保持10 min，MS参数：采用全扫描模式；采集质量数范围：40-510。 【当前权利人】中国烟草总公司郑州烟草研究院 【当前专利权人地址】河南省郑州市高新技术开发区枫杨街2号 【专利权人类型】全民所有制 【统一社会信用代码】9141010041580019XK 【引证次数】3.0 【被引证次数】1 【自引次数】2.0 【他引次数】1.0 【被他引次数】1.0 【家族引证次数】3.0 【家族被引证次数】33

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