【摘要】 一种球等鞭金藻胞外多糖的分离纯化工艺，它以球等鞭金藻培养液为原料制得球等鞭金藻胞外粗多糖；采用离子交换柱层析对球等鞭金藻胞外粗多糖ECPS进行分离，获得中性多糖和酸性多糖组分；将中性多糖和酸性多糖组分加载于凝胶柱层析，获得8个组分，除ECPSⅡ-A组分外，其余多糖组分量较少；采用凝胶柱层析纯化ECPSⅡ-A组分，获得单一多糖组分。经乙醇沉淀和冷冻干燥，制备到胞外纯多糖ECPSⅢ。本发明方法建立了球等鞭金藻胞外多糖的分离纯化工艺，该工艺简单合理，而且具有稳定的重现性和良好的可操作性。为后续研究此多糖的生理活性奠定了良好的实验基础；并且该微藻多糖与其它多糖类物质一样，可以在医药和医学领域中得到应用。 【专利类型】发明授权 【申请人】淮海工学院 【申请人类型】学校 【申请人地址】222000 江苏省连云港市新浦区苍梧路59号淮海工学院海洋学院孙颖颖转 【申请人地区】中国 【申请人城市】连云港市 【申请人区县】海州区 【申请号】CN201210368464.9 【申请日】2012-09-28 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102838684B 【公开公告日】2014-12-03 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102838684B 【授权公告日】2014-12-03 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C08B37/00 【发明人】孙颖颖 【主权项内容】1.一种球等鞭金藻胞外多糖的分离纯化工艺，其特征在于，其步骤如下： (1)选取培养至指数生长阶段的球等鞭金藻培养物，5000rpm/min下离心15min，取上清液经0.22μm微孔滤膜过滤后，45℃下减压浓缩；冷冻干燥后，获得白色粉末状的胞外物质； (2)取胞外物质，加入蒸馏水中，蒸馏水与胞外物质的质量比为15 : 1，混合均匀后，用0.5M NaOH调节pH至9.0，在70℃水浴锅中提取240min；提取结束后，5000rpm/min下离心5min，取上清液加入质量浓度3％的三氯乙酸，4℃下静置4h后，5000rpm/min下离心5min，弃去沉淀；上清液加入3倍体积无水乙醇，4℃下静置24h，5000rpm/min下离心5min，收集白色乳状沉淀；沉淀依次经丙酮、无水乙醇洗脱后，40℃下烘干，粉碎后，得白色粉末状物质即为球等鞭金藻胞外粗多糖ECPS； (3)球等鞭金藻胞外粗多糖溶解后，加载于DEAE-52离子交换层析柱，依次用蒸馏水和1.0mol/L NaOH进行洗脱，每管收集3mL，流速为1.5mL/min，以硫酸-蒽酮法检测多糖，直至检测不出多糖组分，换用下一洗脱液；多糖组分合并收集后，用NaOH进行洗脱所收集的馏分先经透析后，再减压浓缩，分别获得中性多糖ECPSⅠ和酸性多糖ECPSⅡ组分； (4)采用Sephadex G-100凝胶柱层析进一步分离纯化中性多糖和酸性多糖组分，以蒸馏水为洗脱液，每管收集3mL，流速为1.5mL/min，馏分采用硫酸-蒽酮法检测；中性多糖组分ECPSⅠ经Sephadex G-100凝胶柱层析分离后，获得3个组分，分别记为ECPSⅠ-A、ECPSⅠ-B和ECPSⅠ-C；ECPSⅡ经Sephadex G-100凝胶柱层析进一步分离后，获得5个组分，分别记为ECPSⅡ-A、ECPSⅡ-B、ECPSⅡ-C、ECPSⅡ-D和ECPSⅡ-E； (5)富集上述8个多糖组分中多糖组分量最大的ECPSⅡ-A，经多次富集，经减压浓缩后，将其加载于Sephadex G-100凝胶柱层析，用蒸馏水进行洗脱，每管收集3mL，流速为1.5mL/min，馏分采用硫酸-蒽酮法检测；洗脱后，获得单一多糖组分，经乙醇沉淀和冷冻干燥后，得到白色粉末状固体，为胞外纯多糖，记为ECPSⅢ。 【当前权利人】淮海工学院 【当前专利权人地址】江苏省连云港市新浦区苍梧路59号淮海工学院海洋学院孙颖颖转 【统一社会信用代码】12320000466007183X 【家族引证次数】5.0 【家族被引证次数】7

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