【摘要】 本发明公开了一种葡萄糖异构酶的固定化方法，属于生物工程技术领域。本发明构建了产葡萄糖异构酶的重组大肠杆菌xylA/pET24a/BL21(DE3)，以该重组菌作为生产菌株，固定化后葡萄糖异构酶的酶活为2579U/g，酶活回收率达到70.5%，添加金属离子后，75℃下半衰期为29h，较不添加金属离子(半衰期为4h)提高了6.3倍；在相同的转化时间内，以50%葡萄糖为底物连续操作10次，其相对转化率为71%。该固定化方法简单易行，固定化成品颗粒的性能优异，为工业化应用提供参考。 【专利类型】发明授权 【申请人】江南大学 【申请人类型】学校 【申请人地址】214122 江苏省无锡市蠡湖大道1800号 【申请人地区】中国 【申请人城市】无锡市 【申请人区县】滨湖区 【申请号】CN201210581801.2 【申请日】2012-12-27 【申请年份】2012 【公开公告号】CN102994490B 【公开公告日】2014-10-22 【公开公告年份】2014 【授权公告号】CN102994490B 【授权公告日】2014-10-22 【授权公告年份】2014.0 【IPC分类号】C12N11/10; C12R1/19 【发明人】吴敬; 张帆; 邓辉; 陈晟; 陈坚 【主权项内容】一种葡萄糖异构酶的固定化方法，其特征在于，步骤如下：1)在初始培养基中添加适量的Co2+发酵生产葡萄糖异构酶；2)将步骤1)中所述发酵液与壳聚糖溶液混合使菌体絮凝；3)向絮凝物中加入戊二醛进行交联，挤压成型后烘干过夜；具体步骤如下：1)向重组大肠杆菌xylA/pET24a/BL21(DE3)发酵初始培养基中添加0.5-6mM的Co2+，培养至菌体浓度OD600为9-10；2)向发酵液中添加0.1-0.8％的硅藻土；3)将步骤2)得到的发酵液与0.01-0.1％的壳聚糖溶液混合，静置使菌体絮凝；4)向絮凝物中加入0.2-3％戊二醛进行交联，交联一定时间后弃去上清液，挤压成型后烘干。。 【当前权利人】江南大学 【当前专利权人地址】江苏省无锡市蠡湖大道1800号 【专利权人类型】公立 【统一社会信用代码】1210000071780177X1 【引证次数】4.0 【被引证次数】5 【自引次数】1.0 【他引次数】3.0 【被自引次数】3.0 【被他引次数】2.0 【家族引证次数】4.0 【家族被引证次数】9

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